[發明專利]間接標記納米顆粒的抗體檢測雙抗原夾心法及其試劑盒

有效

• 申請號: 200810216400.0
• 申請日: 2008-09-24
• 公開（公告）號: CN101363848A
• 公開（公告）日: 2009-02-11
• 發明（設計）人: 崔鵬;胡鵬;何志強;曹菲;李泓彥
• 申請（專利權）人: 深圳市菲鵬生物股份有限公司
• 主分類號: G01N33/543
• 分類號: G01N33/543;G01N33/569;G01N33/571;G01N33/576
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司
• 代理人: 劉冬;林毅斌

技術領域

本發明涉及免疫檢測領域，具體地說，是涉及一種間接標記納米顆粒 的抗體檢測雙抗原夾心法，以及采用此方法制備的免疫檢測試劑盒。

背景技術

對于標本中目的抗體的檢測，可以利用免疫學的方法進行檢測。而現 在較為廣泛使用的幾種方法是：放射免疫法、免疫熒光法、ELISA法等， 但他們都存在不同程度的缺點和不足。

放射免疫法存在放射性污染，檢測時間長，需要專業儀器設備及專業 人員操作，無法實現單人份檢測；免疫熒光法檢測時間長，需要專業的設 備及專業人員操作，容易受干擾物質干擾產生假陽性；酶聯免疫吸附試驗 (ELISA)具有靈敏度高、特異性好的優勢，已經成為很多項目檢測的主流 方法，但也存在檢測時間長，需要專業的設備及專業人員操作等問題。而 膠體金或乳膠免疫層析法等納米顆粒法雖在靈敏度和特異性方面比ELISA 差些，但其具有快捷、方便、操作簡單、無需專業設備或專業人員操作、 可實現家庭自檢等優勢，能對ELISA檢測方法起到很好的補充作用，已經 應用得越來越廣泛。

納米顆粒法以膠體金或乳膠免疫層析法為例，始于上世紀90年代， 是以免疫學技術為基礎，以膠體金為標記物，結合納米材料標記技術，通 過高分子材料的層析作用，對目的蛋白、激素、分泌物等進行檢測的方法。 從反應原理上，有雙抗原夾心法、雙抗體夾心法、間接法、捕獲法等。

免疫檢測中，納米顆粒的抗體檢測雙抗原夾心法主要原理是：在固相 支持物上面包被抗原，然后第二抗原做標記，加入待檢標本之后，三者在 固相支持物上結合形成“包被抗原-抗體-標記抗原”復合物，由于標記物的信 號而得出最終的判定結果。夾心法由于其靈敏度高、特異性好，使其成為 很多項目檢測的首選方法。

公開號為CN1866019A的中國專利文獻中曾提出一種“梅毒螺旋體抗 原快速檢測試劑及其制備方法”，該試劑采用的是直接標記的納米顆粒的抗 體檢測雙抗原夾心法，以及公開號為CN101021532A的中國專利文獻中曾 提出一種“聯合檢測特異性IgM、IgG抗體的膠體金層析條及其制備方法”， 采用的也是直接標記的納米顆粒的抗體檢測雙抗原夾心法，這種方法是目 前納米顆粒的抗體檢測雙抗原夾心法的主流方法，采用的是標記物和標記 抗原直接標記的方法，其存在的固有缺陷如下：

1.標記物為納米顆粒時，理論上是抗原和納米顆粒的物質的量比例(即 標記比例)越低，標記復合物的靈敏度越高，當標記比例為理想狀態的1： 1時，標記復合物的靈敏度最高。但是，由于直接標記時，標記抗原用量過 低會導致納米顆粒發生沉淀，致使標記失敗，因此直接標記的標記比例相 對于間接標記無法降的更低，所以標記復合物靈敏度偏低。同時，直接標 記時，標記比例相對較高，即抗原使用濃度也偏高，導致標記復合物特異 性降低以及生產成本的升高；

2.標記物為納米顆粒時，采用直接標記時，由于標記物的顆粒大小比 標記抗原的體積大很多倍，使得標記抗原的活性表位受到不同程度的空間 位阻、遮蓋等不利影響，導致標記復合物靈敏度降低，間接標記由于相當 于在納米顆粒和標記抗原之間加了一個手臂——配體，所以對抗原表位的 暴露更有好處；

3.由于標記抗原一般會含有一定量的雜蛋白，標記過程中雜蛋白也與 目的蛋白一起標記到標記物上，從而導致標記復合物特異性降低；

4.直接標記的緩沖液、pH、離子強度等條件并不能保證是標記抗原的 最佳活性條件，標記時的劇烈攪拌、離心、封閉等因素也容易對標記抗原 的活性表位造成影響，導致最終檢測的靈敏度降低。