[發明專利]帕金森病早期診斷標志物

無效

• 申請號: 200810214837.0
• 申請日: 2008-08-29
• 公開（公告）號: CN101659991A
• 公開（公告）日: 2010-03-03
• 發明（設計）人: 陳彪;蔡彥寧
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學宣武醫院
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司
• 代理人: 劉曉東;彭鯤鵬

背景技術

本發明總體而言涉及分子生物學、神經生物學和藥理學領域以及帕金 森病(Parkinson’s?Disease，PD)的診斷、預后或預防性/治療性治療。

帕金森病是一種進行性的神經退行性疾病，其特征為黑質中多巴胺神 經元缺失和存活神經元中存在細胞質內含物(路易體，Lewy?bodies)。帕 金森病的經典臨床特征包括進行性震顫、強直和運動遲緩。然而，在其早 期階段，由于缺乏臨床癥狀和可信的生物標志物使得PD很難被診斷。另 外，PD可能被誤診為其它一些疾病，包括，但不僅限于，例如：特發性 震顫和多系統萎縮等，這進一步干擾了任何潛在診斷。PD診斷可以基于 神經表現，這些只在大腦脆弱區域內實體細胞損失之后才顯現出來。

發明概要

本發明總體而言涉及樣品的分析測試以及用于PD診斷、預后或者預 防性/治療性治療的生物標志物說明的各個方面。其中一個方面，本文提供 了一種診斷或監測帕金森病的方法，其包括：(a)確定在一個或多個時間 點取自受試者的樣品中Bmal1或Per1的表達水平，和(b)將樣品中Bmal1 或Per1的表達水平和參考水平相比較，其中樣品中Bmal1或Per1表達水 平和參考水平的差異指示出受試者患有帕金森病或其分級。

在一個實施方案中，所述參考水平是指未患帕金森病的受試者對照群 體中Bmal1或Per1的表達水平。在一個實施方案中，所述參考水平是指 未患帕金森病的個體中Bmal1或Per1的表達水平。在一個實施方案中， 所述參考水平是指受試者之前的Bmal1或Per1的表達水平。在一個實施 方案中，所述參考水平是指受試者在接受治療方案之前Bmal1或Per1的 表達水平。

在一個實施方案中，所述樣品為血液樣品。在一個說明性實施方案中， 所述樣品包含外周白細胞。

在一個實施方案中，測量表達水平的步驟是通過定量PCR實施。在一 個實施方案中，測量表達水平的步驟是通過northern印跡或點印跡實施。

在一個實施方案中，測定表達水平的步驟包括將Bmal1或Per1的 mRNA的量相對于管家基因mRNA的量進行歸一化。在一個實施方案中， 所述管家基因選自：hCDK4、β-肌動蛋白、3-磷酸甘油醛脫氫酶和18S rRNA。

在一個實施方案中，所述一個或多個時間點包括至少一個處于晝夜循 環中夜間部分的時間點。在一個實施方案中，所述一個或多個時間點包括 選自約23:00至約9:00之間的至少一個時間點。在一個實施方案中，所述 一個或多個時間點來自選自下列的時間段：20:00到22:00，23:00到1:00， 5:00到7:00，以及8:00到10:00。在一個舉例性實施方案中，所述一個或 多個時間點選自：約21:00、約00:00、約06:00和約09:00。 ??在一個實施方案中，比較Bmal1或Per1表達水平與參考水平的步驟 是通過Mann-Whitney?U檢驗來實施的。在一個實施方案中，受試者Bmal1 或Per1表達水平與參考水平的差異與受試者帕金森病分級正相關。在一個 實施方案中，帕金森病分級是通過Hoehn?&?Yahr分級系統測定的。在一 個實施方案中，確定受試者是否患有帕金森病或其分級的步驟是對Hoehn &?Yahr分級系統所確定的分級和受試者Bmal1或Per1表達水平與參考水 平的差異之間進行Pearson相關性分析。在一個實施方案中，帕金森病的 分級通過UPDRS量表進行評價。

在一個實施方案中，相比于參考水平，受試者Bmal1表達水平在選自 約21:00、約00:00和約06:00的一個或多個時間點處降低指示出受試者患 有帕金森病或其分級。在一個實施方案中，相比于參考水平，受試者Per1 表達水平在約00:00、約06:00或同時在約00:00和約06:00時升高指示出 受試者患有帕金森病或其分級。在一個實施方案中，相比于參考水平，受 試者Per1表達水平在21:00時降低指示出受試者患有帕金森病或其分級。

在一些示例性實施方案中，所述方法另外包括通過測量來源于受試者 取自至少兩個時間點之間的樣品中Per1和/或Bmal1的表達水平以及比較 至少兩個時間點之間Per1和/或Bmal1的表達水平來確定受試者中Per1和 /或Bmal1表達模式的步驟。在一個實施方案中，受試者Per1在約21:00 和約00:00時表達水平比約06:00和09:00時低的表達模式指示出受試者患 有帕金森病。