[發明專利]制備可溶高活性重組人表皮生長因子的方法

有效

• 申請號: 200810211603.0
• 申請日: 2008-09-22
• 公開（公告）號: CN101353659A
• 公開（公告）日: 2009-01-28
• 發明（設計）人: 楊霞
• 申請（專利權）人: 楊霞
• 主分類號: C12N15/12
• 分類號: C12N15/12;C12N15/70;C07K14/485;C07K1/14
• 代理公司: 山西太原科衛專利事務所
• 代理人: 朱源

技術領域

本發明涉及基因重組技術領域，具體為一種制備可溶高活性重組人表皮生 長因子的方法。

背景技術

人表皮生長因子(human?epidermal?growth?factor，hEGF)是較早被分離鑒定 的一種生長因子，因具有促進表皮增厚及角質化而得名。它是一種由53個氨基 酸組成、分子量為5400Da的耐熱單鏈低分子多肽，三維結構已經解出。在人體 內，它主要由領下腺、腎臟、胰腺、十二指腸等腺體分泌，幾乎存在于所有體 液、分泌物及大多數組織中。

作為一種強有力的細胞分裂促進因子，hEGF具有多種生物學活性，分為以 下幾個方面：1、促進細胞的增殖。hEGF是一個廣譜促分裂劑，能促進細胞內 DNA、RNA、蛋白質以及細胞外大分子的合成，加速皮膚、角膜上皮、氣管上 皮、乳腺上皮等組織的增殖和分化。應用精制的重組人表皮生長因子可以促進 創面愈合，對燒傷淺II、深II度(尤其是后者)慢性創面、供皮區等具有不同 程度的加速愈合的作用。目前，已有用于治療消化性潰瘍和燒傷等的hEGF制 劑出現。2、增加物質的轉運和糖代謝。hEGF能促進鉀離子的轉運和H-Na離 子交換，還能導致肝細胞的鈣離子擴濃度增加，能激活糖酵解和糖的異生。3、 增加前列腺素的合成和釋放。hEGF能激活磷脂酶A₂，從而促進上皮細胞膜釋 放花生四烯酸，也能直接通過調節環加氧酶和脂加氧酶的含量或活性來影響前 列腺素的合成。4、對骨和鈣代謝的影響。hEGF能通過多個環節，如影響胃腸 對鈣的吸收以影響破骨細胞和成骨細胞的活性，調節骨和鈣的代謝。

80年代以來，潛在的巨大經濟效益吸引了國內外許多研究機構和企業進行 其系列產品的開發。迄今為止，hEGF的生產方法主要包括三種。第一，化學合 成法。hEGF是由53個氨基酸組成的多肽，采用固相合成法可實現hEGF的全 合成。1988年，Marchi等首先采用固相合成法完成了hEGF的全合成，但由于 hEGF分子中存在3對二硫鍵及其他多種官能團，因而合成的產物純度及產率都 無法滿足工業化生產要求。第二，生物提取法。機體中的主要由腮腺、領下腺、 胰腺細胞分泌。hEGF也見于正常生理狀態下的幾乎所有體液中。一般認為正常 人體液中腎內尿液尤其是孕婦尿、胰腺、甲狀腺等處含量較高。從這些體液中 分離是十分困難的，原因在于一方面含量極微，另一方面是常與人表皮生長因 子受體結合形成復合物。因此，從人體液中分離得到主要僅限于發現之初的理 論研究。第三，基因重組生產。隨著基因重組技術的發展，人們開始進行重組 hEGF大規模生產的嘗試。目前，該基因已在多種宿主系統中得到克隆、表達與 分泌。包括重組大腸桿菌、重組短芽孢桿菌、重組釀酒酵母和巴氏畢赤酵母、 重組植物細胞以及哺乳動物細胞。然而這里面產量最有潛力成為工業化生產的 首推重組大腸桿菌發酵。但是目前，利用基因重組方法獲得的hEGF純度低、 產量及活性都較低，推廣利用價值較低。

發明內容

本發明為了解決現有利用化學合成法和生物提取法分別存在各自不同的缺 點以及利用基因重組方法獲得的人表皮生長因子的純度較低、產量及活性都較 低的問題，提供一種制備可溶高活性重組人表皮生長因子的方法。