[發明專利]環介導恒溫擴增方法檢測單核細胞增生李斯特菌

無效

• 申請號: 200810209551.3
• 申請日: 2008-11-28
• 公開（公告）號: CN101748201A
• 公開（公告）日: 2010-06-23
• 發明（設計）人: 李蘇龍
• 申請（專利權）人: 中華人民共和國黑龍江出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04
• 代理公司: 哈爾濱東方專利事務所 23118
• 代理人: 陳曉光

1.一種環介導恒溫擴增方法檢測單核細胞增生李斯特菌的方法，該方法不用于疾病的治療和診斷，其組成包括：預處理、選擇單核細胞增生李斯特菌的靶基因、檢測過程、結果檢測、結果判斷，其特征是：選擇單核細胞增生李斯特菌的靶基因，GenBank登陸號：AF532235，設計2對引物：

內引物為：FIP:TTAGGCGCAGGTGTAGTTGC?CTGCTGCAGAAACAAAAACTGAA

BIP:GATCAAAATGCTACTACACACGCTG?CCGTATTTTACGGATAAAGCCCA

外引物為：F3:?ACACAAGAAGTGAAAAAAGAAAC

B3:?ACATAATGTCTTGAACAGAAACA

通過提供特異性的引物組，對單核細胞增生李斯特菌的核酸進行LAMP基因擴增，檢測樣品中是否存在特定基因片段，進而確定樣品中是否存在單核細胞增生李斯特菌。

2.根據權利要求1所述的環介導恒溫擴增方法檢測單核細胞增生李斯特菌的方法，其特征是：所述的結果檢測是取出反應管，冷卻至室溫，以2000r/min轉速離心10sec，分別加入1μL?顯色液，輕輕混勻，在黑色背景下觀察顏色變化或電泳檢測。

3.根據權利要求1所述的環介導恒溫擴增方法檢測單核細胞增生李斯特菌的方法，其特征是：所述的結果判斷在陰性對照反應管液體為橙色，陽性對照反應管液體呈綠色的條件下：待檢樣品反應管液體呈綠色，該樣品結果為單核增生李斯特氏菌陽性；待檢樣品反應管液體呈橙色則可報告單核增生李斯特氏菌檢驗結果為陰性；若陰陽性對照反應管結果與上述情況不符，則本次檢測結果無效，應重新檢測。

4.根據權利要求1所述的環介導恒溫擴增方法檢測單核細胞增生李斯特菌的方法，其特征是：所需LAMP?反應管數的計算方法為：設LAMP?反應管數為n，則n=樣品數+1個陽性對照+1個陰性對照+1。