[發明專利]人源乙肝病毒表面抗體的制備方法

無效

• 申請號: 200810204039.X
• 申請日: 2008-12-04
• 公開（公告）號: CN101748129A
• 公開（公告）日: 2010-06-23
• 發明（設計）人: 穆海東;汪寧梅;穆宇豪;黎颯
• 申請（專利權）人: 上海裕隆臨床檢驗中心有限公司
• 主分類號: C12N15/13
• 分類號: C12N15/13;C12N15/63;C07K16/08
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種制備人源乙肝病毒表面抗體的方法，包括如下步驟：

(1)使用乙肝患者外周血，分離淋巴細胞，提取它們的總RNA為模版；

(2)用建立噬菌體文庫所設計的引物，擴增抗體的重鏈可變區基因和輕鏈可變區基因；所述的輕鏈可變區基因包括κ鏈基因和λ鏈基因；

(3)用得到的擴增產物構建重鏈可變區基因和輕鏈可變區基因的噬菌體載體，經轉化培養獲得噬菌體文庫；

(4)用乙肝病毒表面抗原包被的酶標板篩選表達特異性乙肝表面抗體的噬菌體；

(5)以雙酶切剔出篩選所得的噬菌體載體上的gIII基因，從而得到可溶性的表達載體；

(6)轉化大腸桿菌后誘導表達，獲取高特異性的抗體。

2.如權利要求1所述的制備人源乙肝病毒表面抗體的方法，其特征在于：建立噬菌體文庫所需的引物序列如下：

擴增乙肝病毒表面抗體重鏈可變區基因的引物序列如下：

上游引物：

VH135??5-AG?GTG?CAG?CTG?CTC?GAG?TCT?GG-3，

VH2????5-CAG(A/G)TC?ACC?TTG?CTC?GAG?TGT?GG-3，

VH4????5-CAG?GTG?CAG?CTG?CTC?GAG?TCG?GG-3，

VH4b???5-CAG?GTG?CAG?CTA?CTC?GAG?TGG?GG-3，

VH6????5-CAG?GTA?CAG?CTG?CTC?GAG?TCA?GG-3，

下游引物：

CGId???5-GCA?TGT?ACT?AGT?TTT?GTC?ACA?AGA?TTT?GG-3；

擴增乙肝病毒表面抗體輕鏈可變區基因的引物序列如下：

擴增κ鏈基因上游引物：

Vκ1???5-GAG?CCG?CAC?GAG?CCC?GAG?CTC?CAG?ATG?ACC?CAG?TCT?CC-3，

Vκ3???5-GAG?CCG?CAC?GAG?CCC?GAG?CTC?GTG(A/T)TG?AC(A/G)CAG?TCT?CC-3，

Vκ2/4?5-GAG?CCG?CAC?GAG?CCC?GAG?CTC?GTG?ATG?AC(C/T)CAG?TCT?CC-3，

Vκ5???5-GAG?CCG?CAC?GAG?CCC?GAG?CTC?ACA?CTC?ACG?CAG?TCT?CC-3，

擴增κ鏈基因下游引物：

CκId??5-GCG?CCG?TCT?AGA?ATT?AAC?ACT?CTC?CCC?TGT?TGA?AGC?TCT?TTG?TGACGG?GCG?AAC?TCA?G-3；

擴增λ鏈基因上游引物：

Vλ1a??5-GAG?CCG?CAC?GAG?CCC?GAG?CTC?GTG?TTG?ACG?CAG?CCG?CCC?TC-3，

Vλ1b??5-GAG?CCG?CAC?GAG?CCC?GAG?CTC?GTG?CTG?ACT?CAG?CCA?CCC?TC-3，

Vλ2???5-GAG?CCG?CAC?GAG?CCC?GAG?CTC?GCC?CTG?ACT?CAG?CCT(C/G)CCTCC?GT-3，

Vλ3/9?5-GAG?CCG?CAC?GAG?CCC?GAG?CTC?G(A/T)G?CTG?ACT?CAG?CCACC(C/T)TC-3，

Vλ7/8?5-GAG?CCG?CAC?GAG?CCC?GAG?CTC?GTG?CTG?AC(T/C)CAG?GAGCC(C/A)TC-3，

擴增λ鏈基因下游引物：

Cλ2d??5-G?CGC?CGT?CTA?GAA?TTA?TGA?ACA?TTC?TGT?AGG-3。

3.如權利要求1所述的制備人源乙肝病毒表面抗體的方法，其特征在于：所述的噬菌體載體為pComb3H載體。