[發明專利]一種人細胞色素c的制備方法無效
| 申請號： | 200810202928.2 | 申請日： | 2008-11-18 |
| 公開（公告）號： | CN101736005A | 公開（公告）日： | 2010-06-16 |
| 發明（設計）人： | 應天雷;謝琎;鐘方芳;王中華;馮彥嬌;黃仲賢;譚相石 | 申請（專利權）人： | 復旦大學 |
| 主分類號： | C12N15/12 | 分類號： | C12N15/12;C12N15/70;C07K14/80 |
| 代理公司： | 上海正旦專利代理有限公司 31200 | 代理人： | 吳桂琴;包兆宜 |
| 地址： | 20043*** | 國省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 細胞 色素 制備 方法 | ||
1.一種人細胞色素c的制備方法，包括人細胞色素c核苷酸編碼序列與表達載體連接構建重組質粒，然后轉化基因工程菌培養擴增并分離純化，其特征是，基因工程菌擴增時接種于含2-4克/升的SB培養液。
2.根據權利要求1所述的人細胞色素c的制備方法，其特征是，所述表達載體是pBTR1或者pBTR2。
3.根據權利要求1所述的人細胞色素c的制備方法，其特征是，所述表達載體是pBTR-fd質粒。
4.根據權利要求1所述的人細胞色素c的制備方法，其特征是，所述基因工程菌是Rosetta(DE3)pLysS、Rosetta(DE3)或者BL21(DE3)pLysS。
5.根據權利要求1所述的人細胞色素c的制備方法，其特征是，基因工程菌擴增溫度為35-40度，時間為18-28小時。
6.根據權利要求1所述的人細胞色素c的制備方法，其特征是，所述分離純化過程是將擴增培養后的菌體依次經過超聲破菌，離心，鹽析，透析，過柱和脫鹽過程。
7.根據權利要求6所述的人細胞色素c的制備方法，其特征是，所述過柱是上清液通過CM-52陽離子交換柱，再通過CM-瓊脂糖高通量陽離子交換柱。
8.根據權利要求1所述的人細胞色素c的制備方法，其特征是，擴增培養時，培養液用塑料膜封口。
9.根據權利要求1所述的人細胞色素c的制備方法，其特征是，SB培養液含有8-15g/L蛋白胨、5-10g/L母提取物、3-6g/L?NaCl、1-5mL/L甘油和1-10g/L?NaNO3。
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