[發明專利]飼料工業專用的外源性復合酶制劑及其制備方法和應用

無效

• 申請號: 200810202911.7
• 申請日: 2008-11-18
• 公開（公告）號: CN101735992A
• 公開（公告）日: 2010-06-16
• 發明（設計）人: 鐘誠
• 申請（專利權）人: 國龍科技飼料(上海)有限公司
• 主分類號: C12N9/42
• 分類號: C12N9/42;C12N9/24;C12N9/26;C12N9/16;A23K1/165;C12R1/10;C12R1/07;C12R1/685
• 代理公司: 上海科盛知識產權代理有限公司 31225
• 代理人: 趙志遠

1.飼料工業專用的外源性復合酶制劑，其特征在于，包含木聚糖酶，β-甘露聚糖酶，纖維素酶，β-葡聚糖酶，果膠酶等五種水溶性非淀粉多糖酶(SNSP酶)，并同時含有植酸酶；該外源性復合酶制劑包含固態型或液態型兩種劑型。

2.根據權利要求1所述的飼料工業專用的外源性復合酶制劑，其特征在于，當添加量為200g/噸飼料時，固態型外源性復合酶制劑中各酶酶活性為：3800U/g≤木聚糖酶活性≤5700U/g，1800U/g≤β-甘露聚糖酶活性≤2500U/g，1900U/g≤纖維素酶活性≤2600U/g，1200U/g≤β-葡聚糖酶活性≤2050U/g，2450U/g≤果膠酶活性≤2920U/g，2250U/g≤植酸酶活性≤2650U/g。

3.根據權利要求1所述的飼料工業專用的外源性復合酶制劑，其特征在于，當添加量為150ml/噸飼料時，液態型外源性復合酶制劑中各酶活性為：5060U/ml≤木聚糖酶活性≤7600U/ml，2400U/ml≤β-甘露聚糖酶活性≤3350U/ml，2550U/ml≤纖維素酶活性≤3480U/ml，1600U/ml≤β-葡聚糖酶活性≤2750U/ml，3260U/ml≤果膠酶活性≤3890U/ml，3000U/ml≤植酸酶活性≤3530U/ml。

4.根據權利要求2或3所述的飼料工業專用的外源性復合酶制劑，其特征在于，所述的木聚糖酶，β-甘露聚糖酶，纖維素酶，β-葡聚糖酶，果膠酶等五種水溶性非淀粉多糖酶各酶活性之和與植酸酶活性之間的最佳活性比是5.5∶1。

5.飼料工業專用的外源性復合酶制劑的制備方法，其特征在于，該方法包括：

(1)五種水溶性非淀粉多糖酶的制備，包括木聚糖酶的制備，β-甘露聚糖酶的制備，纖維素酶的制備，β-葡聚糖酶的制備，果膠酶的制備；

(2)植酸酶的制備；

(3)將制備得到的五種水溶性非淀粉多糖酶與植酸酶按比例組合，得到飼料工業專用的外源性復合酶制劑。

6.根據權利要求5所述的飼料工業專用的外源性復合酶制劑的制備方法，其特征在于，所述的木聚糖酶的制備包括以下工藝步驟：

(1)發酵培養

a.菌種與培養基

菌種黑曲霉斜面培養基(PDA)：馬鈴薯400g、葡萄糖20g、瓊脂18g、水1000ml，液體種子培養基：葡萄糖50g、蛋白胨0.20g、(NH₄)₂HPO₄0.56g、KH₂PO₄0.144g、MgSO₄·7H₂O0.12g、啤酒45ml、蒸餾水1000ml，發酵培養基培養為：玉米芯5％，K₂HPO₄0.2％，豆粕2％，麩皮93％，水含量60％；

b.菌種培養

挑取PDA斜面培養基上單菌落于液體種子培養基，200r/min，搖瓶培養，溫度28℃，時間24h，孢子數大于109/ml；

c.發酵培養

按8％接種量將種子培養液接種于發酵培養基上，充分攪拌混勻，溫度30℃，12小時翻曲一次，培養64h；測濕曲酶活可達15000U/g以上；木聚糖酶活性測定參照DNS法，于2.4mL0.5％樺木木聚糖溶液(pH4.6檸檬酸2Na₂HPO₄緩沖液配制)中加入0.1mL適當稀釋的酶液，50℃準確反應15min，立即加入2.5mlDNS試劑終止反應，沸水浴7min顯色，迅速冷卻后加水5mL混勻，于540nm比色；每分鐘產生相當于1μmol還原糖(以木糖計)的酶量定義為1個酶活性單位(IU)；

(2)酶的提取

酶的分離純化除特別注明外，所有純化過程均在10℃以下進行，所用緩沖液均為pH7.5，0.02mol/L的Na₂HPO₄NaH₂PO₄緩沖溶液；取一定量的固態發酵曲，用6倍體積緩沖液40℃振蕩浸提30min，過濾收集第1次濾液，得粗酶液，于粗酶液中添加硫酸銨至65％飽和度，4℃靜置過夜，離心(4℃，10000r/min，15min)，棄上清液；沉淀用少量緩沖液溶解，測酶活，根據酶活檢測結果，選擇進行濃縮或稀釋，用于配制復合酶。