[發(fā)明專利]直接的mRNA富集定量方法無(wú)效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 200810202302.1 | 申請(qǐng)日： | 2008-11-06 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN101392295A | 公開(kāi)（公告）日： | 2009-03-25 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 董德賢;任慧娟;朱紅亮;許煜泉;李榮秀 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 上海交通大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | C12Q1/68 | 分類號(hào)： | C12Q1/68 |
| 代理公司： | 上海交達(dá)專利事務(wù)所 | 代理人： | 王錫麟;王桂忠 |
| 地址： | 200240*** | 國(guó)省代碼： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 直接 mrna 富集 定量 方法 | ||
1.一種直接的mRNA富集定量方法，其特征在于，包括如下步驟：
第一步，探針設(shè)計(jì)：利用待檢測(cè)的mRNA序列設(shè)計(jì)和合成互補(bǔ)的DNA或RNA探針，5’端或3’端用生物素標(biāo)記；
第二步，保護(hù)雜交：待檢測(cè)的菌體或組織樣品在緩沖液中經(jīng)破碎后，用設(shè)計(jì)的探針進(jìn)行雜交，同時(shí)保護(hù)待檢測(cè)的mRNA部分片段；
第三步，用S1和RNAse酶切除去單鏈DNA、未保護(hù)的RNA、過(guò)量的探針、錯(cuò)配的雜交體，留下完全配對(duì)的，帶生物素標(biāo)記的探針和mRNA雜交體；
第四步，用鏈親和素包被的磁珠富集帶生物素標(biāo)記的探針和mRNA雜交體，同時(shí)去除各種細(xì)胞碎片、蛋白雜質(zhì)；
第五步，用雙鏈結(jié)合染料直接定量mRNA。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的直接的mRNA富集定量方法，其特征是，所述的待檢測(cè)的mRNA包括各種生物體基因經(jīng)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的核酸產(chǎn)物。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的直接的mRNA富集定量方法，其特征是，所述的待檢測(cè)的菌體或組織樣品包括細(xì)菌、真菌、植物組織、動(dòng)物組織。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的直接的mRNA富集定量方法，其特征是，所述的緩沖液包括各種雜交緩沖液。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的直接的mRNA富集定量方法，其特征是，所述的鏈親和素包被的磁珠是指用鏈親和素經(jīng)物化處理包被的磁性材料，包括納米磁性材料。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的直接的mRNA富集定量方法，其特征是，所述的雙鏈結(jié)合染料包括各種能與RNA/RNA，DNA/RNA雜交體結(jié)合或附著的染料。
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