[發(fā)明專利]一種高靈敏度檢測肺炎支原體的靶序列及試劑盒

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810201637.1
• 申請日: 2008-10-23
• 公開（公告）號: CN101760519A
• 公開（公告）日: 2010-06-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 沈維祥;吳大治;夏懿
• 申請（專利權(quán)）人: 上海復(fù)星醫(yī)藥(集團)股份有限公司;上海復(fù)星醫(yī)學(xué)科技發(fā)展有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/31;G01N21/64
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種檢測肺炎支原體的遺傳標(biāo)記物，其特征在于，它具有SEQ?ID?NO：1中連續(xù)的280bp高度保守重復(fù)核苷酸序列。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的遺傳標(biāo)記物，其特征在于，它具有SEQ?ID?NO：2中連續(xù)的123個核苷酸序列。

3.一種檢測肺炎支原體的試劑盒，其特征在于，它含有特異性擴增肺炎支原體遺傳標(biāo)記物的引物對，所述的引物序列一條與SEQ?ID?NO：1所示的序列相同，且另一個引物序列與SEQ?ID?NO：1所示的序列互補，其引物對為：

上游引物SEQ?ID?NO：3為：5’-TTC?TCC?ACC?GGG?TTC?AAC?CT-3’

下游引物SEQ?ID?NO：4為5’-AGG?CGC?GGT?TAT?ATC?ATC?CA-3’

或者包含有上述序列的向5’端或/和3’端延長的序列；

或者與上述序列同源性大于85％的序列；

或者上述序列的堿基互補序列；

或者使用上述所有序列中的任意一種或一種以上的組合。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，還含有探針，所述探針的核苷酸與SEQ?ID?NO：1所示的序列相同或互補，其檢測探針為：

檢測探針SEQ?ID?NO：5為：5’-MAR?CTG?GAT?TGG?GAA?TGG?GTA?CAGGT-MAR-3’；

或者包含有上述序列的向5’端或/和3’端延長的序列；

或者與上述序列同源性大于85％的序列；

或者上述序列的堿基互補序列；

或者使用上述所有序列中的任意一種或一種以上的組合。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，該試劑盒還包括DNA提取液、熒光PCR反應(yīng)液、定量參考品、陽性對照品和陰性對照品。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的試劑盒，其特征在于，所說的參考品為如下DNA序列SEQ?ID?NO：6為：

5’-TTCTCCACCG?GGTTCAACCT?TGTGGGGTCG?GTGCTCGACCAGGTGTTGGA?TTATGTGCCC?TGGATTGGGA?ATGGGTACAGGTATGGCAAT?AACCACCGGG?GCGTGGATGA?TTATAACCGCGCCT-3’。

7.一種檢測樣品中肺炎支原體的方法，其特征在于，它包括操作步驟：

①樣品DNA提取；

②將提取的DNA作為模板，用特異性擴增肺炎支原體遺傳標(biāo)記物的引物對(SEQ?ID?NO：3和SEQ?ID?NO：4)進行PCR擴增。

③檢測擴增產(chǎn)物是否存在，存在擴增產(chǎn)物表示樣品呂存在肺炎原體。

8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于，所述的檢測方法是通過檢測熒光信號的強弱來檢測樣品中肺炎支原體。