[發明專利]番紅花病毒檢測方法

無效

• 申請號: 200810201020.X
• 申請日: 2008-10-10
• 公開（公告）號: CN101724710A
• 公開（公告）日: 2010-06-09
• 發明（設計）人: 秦路平;韓婷;楊弘;吳威巍
• 申請（專利權）人: 上海華宇藥業有限公司
• 主分類號: C12Q1/70
• 分類號: C12Q1/70;C12Q1/68
• 代理公司: 上海新天專利代理有限公司 31213
• 代理人: 王巍

技術領域

本發明涉及生物檢測技術，具體涉及番紅花病毒檢測方法。

背景技術

番紅花(Crocus?sativus?L.)又名藏紅花、西紅花，系鳶尾科(Iridaceae)番紅花屬多年生草本植物。原產南歐各國及伊朗等地，后經印度轉入西藏再傳入中國，引種栽培成功，故又名藏紅花或西紅花。由于番紅花只是柱頭入藥，產量極低，采收耗時費力；同時種源少，適宜栽培地區有限、條件苛刻等因素致使其價格昂貴，在我國被列為珍惜名貴的中藥材，并被譽為“植物黃金”。其雌蕊柱頭是名貴中藥，具有活血化瘀、涼血解毒、解郁安神之功效，是傳統的婦科、傷科良藥。臨床上還主要用于胃病、調經、麻疹、發熱、肝脾腫大等的治療。尤其是近年來在治療心腦血管疾病方面取得了較好的療效。

中國藏紅花的栽培品種主要來自于德國和日本，在田間種植2～3年后均嚴重退化，葉片出現黃色條斑，整株矮化、黃化，頂端枯死，提前倒苗，球莖畸小，柱頭產量大大降低。國內外報道其病源為蕪菁花葉病毒(turnip?mosaic?virus，TuMV)、鳶尾花葉病毒(iris?mosaic?virus，IMV)、菜豆黃花葉病毒(beam?yellow?mosaic?virus，ByMV)、黃瓜花葉病毒(cu2cumber?mosaic?virus，CMV)及煙草脆裂病毒(tobaccorattle?virus，TRV)，其中TuMV、IMV和ByMV屬于馬鈴薯Y病毒(potyvirus)。經田間調查和病毒學鑒定，導致藏紅花花品質衰退、產量遞減的植物病源是TuMV，這種病毒對藏紅花的危害巨大，發生面積大，田間發病率為70％～97％。因而檢測和發現番紅花病毒很重要，但現有檢測方法不太方便，例如：指示植物法、電鏡技術、酶聯免疫技術和總核酸提取法等，有一定局限性。

發明內容

本發明要解決的技術問題在于克服上述不足之處，提供一種快速、靈敏、特異的檢測番紅花病毒的方法。

本發明提供了一種番紅花病毒檢測方法，根據番紅花易感CMV(黃瓜花葉病毒)，TuMV(蕪菁花葉病毒)，PVY(馬鈴薯Y病毒)，TRV(煙草脆裂病毒)病毒核苷酸序列設計的特異性引物，提取植物組織的總RNA后，采用RT-PCR的方法，檢測番紅花病毒。該方法包括下列步驟：

1、引物設計

根據番紅花病毒的核苷酸序列設計了擴增番紅花病毒外殼蛋白的特異性引物。根據已報道的病毒的CMV、PVY、TuMV、TRV核苷酸序列設計了擴增病毒的特異性引物，引物序列如下：

表1番紅花病毒檢測用引物