[發明專利]一種豬氟烷基因基因型的檢測方法

無效

• 申請號: 200810200152.0
• 申請日: 2008-09-19
• 公開（公告）號: CN101358245A
• 公開（公告）日: 2009-02-04
• 發明（設計）人: 李建穎;劉煒;吳昊旻;馬芳芳;黃國慶
• 申請（專利權）人: 上海市動物疫病預防控制中心
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12N15/11;G01N21/64
• 代理公司: 上海申匯專利代理有限公司
• 代理人: 林煒

1.一種豬氟烷基因基因型的檢測方法，其特征在于包括如下步驟：

a)對豬氟烷基因進行PCR擴增，然后對擴增出的堿基片段進行堿基測序，確定豬氟烷基因的突變位點，根據突變位點兩端的堿基序列設計兩組引物，其中一組引物的上游引物3’端和野生型的基因位點匹配，另一組引物的上游引物3’端和突變型的基因位點匹配，兩組的下游引物相同；

b)將待檢測豬的樣品DNA分別與野生型引物、突變型引物在兩個反應體系中同時進行PCR擴增，擴增后每個樣品與每組引物產生一個熒光信號，即每個樣品產生兩個熒光信號，隨著PCR反應的進行，PCR反應產物不斷累計，熒光信號強度也等比例增加，每經過一個循環，收集一次熒光信號，通過熒光信號的強度變化監測產物量的變化，從而得到一條熒光信號強度曲線圖，根據兩個熒光信號的增強先后次序即可得出豬氟烷基因的基因型。

2.如權利要求1所述的一種豬氟烷基因基因型的檢測方法，其特征在于：所述的野生型的基因位點的上游引物為5’CAA?TGG?TGT?GGC?CGT?GT?3’，野生型基因位點的下游引物為5’GCC?CAG?ACC?TGG?TGA?CAT?A?3’，突變型基因位點的上游引物為5’CAA?TGG?TGT?GGC?CGT?GC?3’，突變型基因位點的下游引物為5’GCC?CAG?ACC?TGG?TGA?CAT?A?3’。

3.如權利要求1所述的一種豬氟烷基因基因型的檢測方法，其特征在于：在b步驟中，擴增體系為熱啟動Taq?DNA聚合酶0.1U/ul、三磷酸脫氧核糖核苷酸0.2mM、上下游引物各0.2uM、樣品DNA?50ng/ul以及SYBRGreen?I染料、緩沖液，加ddH₂O至20ul；擴增反應條件為首先95℃變性15min，然后94℃變性15sec、50℃退火20sec、72℃復性20sec，共40個循環。

4.如權利要求1所述的一種豬氟烷基因基因型的檢測方法，其特征在于：當野生型引物的熒光信號首先增強時，即可得出樣品DNA為野生型。

5.如權利要求1所述的一種豬氟烷基因基因型的檢測方法，其特征在于：當突變型引物的熒光信號首先增強時，即可得出樣品DNA為突變型。

6.如權利要求1所述的一種豬氟烷基因基因型的檢測方法，其特征在于：當野生型引物和突變型引物的熒光信號同時增強時，即可得出樣品DNA為雜合型。