[發(fā)明專利]一種新的降低支氣管哮喘呼吸阻力的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810195027.5
• 申請日: 2008-11-04
• 公開（公告）號: CN101732779A
• 公開（公告）日: 2010-06-16
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 張文程;何偉奇;朱敏生
• 申請（專利權(quán)）人: 張文程;何偉奇;朱敏生
• 主分類號: A61M5/178
• 分類號: A61M5/178;A61K31/138;A61P11/06
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• 代理人: 暫無信息

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及到病理學(xué)領(lǐng)域。具體地說，本發(fā)明通過抑制MLCK分子的活性來達到降低支氣管哮喘呼吸阻力的目的。

背景技術(shù)

支氣管哮喘是一種嚴(yán)重危害人群健康的疾病，全世界約有近兩億人患哮喘，統(tǒng)計發(fā)病率因國別而異，大約在1％-5％之間，其中兒童和婦女占有重要比例。隨著工業(yè)化進程和環(huán)境污染的加劇，哮喘的發(fā)病率和并發(fā)癥機率有上升趨勢。哮喘已成為嚴(yán)重的社會問題引起世界各國的重視。

哮喘病不是一種單一的疾病，而是一種產(chǎn)生相同癥狀的多種發(fā)病機制的綜合癥。哮喘病不斷出現(xiàn)在遺傳性過敏中，氣源性過敏原通常是哮喘病綜合癥的誘導(dǎo)原。而且，過敏原接觸在起始和保持呼吸道炎癥反應(yīng)中具有重要作用。這些炎癥反應(yīng)易于使遺傳性過敏的個體增加呼吸道的過敏反應(yīng)。非特異性刺激如病毒上呼吸道感染、鍛煉、冷空氣、煙、氧化性空氣污染、強水蒸氣、有害氣體和微粒物質(zhì)可以觸發(fā)有呼吸道炎癥的哮喘病人的過敏反應(yīng)。對非固醇炎癥藥物治療和職業(yè)接觸的敏感性也可引起哮喘的非特異表型發(fā)作。

哮喘病的重要特征有可逆性的氣流阻塞、氣道高反應(yīng)性和炎癥反應(yīng)。其中，氣道平滑肌細胞一直被認為與支氣管收縮有關(guān)。因此最早期的哮喘治療如煙草、吐根、曼陀羅等都是利用它們對氣道平滑肌的舒張效應(yīng)來實現(xiàn)的。近年來，氣道平滑肌在哮喘中的作用得到進一步證實，例如氣道平滑肌的收縮性在致敏病人的支氣管和哮喘動物的平滑肌細胞中增強；去除平滑肌可以改善哮喘癥狀等等。

關(guān)于氣道平滑肌的收縮機制目前尚存在爭議。爭議點在于肌球蛋白輕鏈的磷酸化能否直接促進肌肉收縮，而負責(zé)肌球蛋白輕鏈磷酸化的酶又是怎樣相互協(xié)調(diào)作用的，平滑肌起始和持續(xù)收縮的機制有什么不同等等。有文獻報道提示：肌球蛋白輕鏈激酶(myosin?light?chainkinase，MLCK)可以磷酸化肌球蛋白的調(diào)節(jié)輕鏈Regulatory?light?chain(RLC)，從而在收縮中可能發(fā)揮重要作用，但該研究結(jié)果主要通過酶活性與收縮相關(guān)性研究以及通過體外實驗完成的。眾所周知，這種相關(guān)性研究無法提供關(guān)于MLCK功能的直接證據(jù)，體外實驗也無法模擬體內(nèi)的真實情況，所以也無法得出明確結(jié)論。因此，如何闡明MLCK在平滑肌收縮中的功能、在疾病發(fā)病機制以及在疾病防治中的價值一直是人們關(guān)注的焦點。基因敲除技術(shù)成熟以后，由于它可以在時間和空間上進行特異性的去除目的基因，因而成為研究目的基因在體內(nèi)功能最有效的方法。在本發(fā)明中，我們利用條件性基因敲除技術(shù)，建立了平滑肌特異性敲除MLCK的小鼠，系統(tǒng)的研究了MLCK在支氣管平滑肌收縮中的功能。研究表明MLCK在氣道平滑肌的收縮中起到了非常關(guān)鍵的作用，同時還發(fā)現(xiàn)MLCK敲除小鼠的支氣管呼吸阻力顯著的降低，并因此而改善哮喘癥狀和病程。由此，我們找到了一種新的降低支氣管哮喘呼吸阻力的方法，即通過抑制MLCK的活性來實現(xiàn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種通過抑制MLCK活性來降低支氣管哮喘呼吸阻力的方法。

本發(fā)明還有一個目的是提供一種用來研究支氣管哮喘的動物模型。

本發(fā)明的有益效果：本發(fā)明利用基因敲除動物，系統(tǒng)研究了MLCK在支氣管平滑肌收縮中的功能，發(fā)現(xiàn)MLCK在氣道平滑肌的收縮中起到了非常關(guān)鍵的作用，同時還發(fā)現(xiàn)MLCK敲除小鼠的支氣管呼吸阻力顯著的降低，并因此而改善哮喘癥狀和病程。由此找到了一種新的降低支氣管哮喘呼吸阻力的方法，即通過抑制MLCK的活性來實現(xiàn)。

附圖說明

圖1為小鼠內(nèi)基因敲除MLCK的策略。

圖2為MLCK敲除后氣管收縮力的變化情況。

圖3為MLCK敲除后氣管RLC磷酸化的變化情況。

圖4為小鼠哮喘模型的制作過程。

圖5為MLCK敲除后支氣管呼吸阻力的變化情況。

具體實施方式

以下通過實施例對本發(fā)明作進一步的闡述。

1.氣道平滑肌特異性敲除MLCK小鼠的構(gòu)建