[發(fā)明專利]阿佛曼鏈霉菌種的重離子輻照誘變及輻照菌種的培養(yǎng)方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810187966.5
• 申請日: 2008-12-31
• 公開（公告）號: CN101768585A
• 公開（公告）日: 2010-07-07
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李文建;王曙陽;陳積紅;劉敬;頡紅梅
• 申請（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院近代物理研究所
• 主分類號: C12N15/01
• 分類號: C12N15/01
• 代理公司: 北京中恒高博知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11249
• 代理人: 夏晏平

1.阿佛曼鏈霉菌種的重離子輻照誘變及輻照菌種的培養(yǎng)方法，其特征為

(1)阿佛曼鏈霉素菌種孢子懸液用¹²C⁺⁶重離子束輻照進(jìn)行誘變，輻照劑量范圍為40-70Gy；

(2)將輻照誘變后的孢子懸液和出發(fā)菌種的孢子懸液分別進(jìn)行梯度稀釋，用生理鹽水稀釋至10^-4-10^-5；

(3)將稀釋的懸液準(zhǔn)確轉(zhuǎn)到分離平板培養(yǎng)基上，涂抹均勻，分離單個(gè)菌落，測定最佳正突變率最佳誘變劑量；

(4)對突變明顯的菌落，用接種環(huán)取菌落孢子接種在斜面培養(yǎng)基上；

(5)將(3)的平板培養(yǎng)基與(4)的斜面培養(yǎng)基包扎后置于28℃恒溫箱中培養(yǎng)6天，再置于2-4℃冰箱中等待菌種接種；

(6)對比輻照誘變菌種與出發(fā)菌種的平板培養(yǎng)結(jié)果和斜面培養(yǎng)結(jié)果，得出最佳正突變率、最佳誘變劑量，測出致死率、觀察菌落形態(tài)，得到正突變的菌株。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的阿佛曼鏈霉菌種的重離子輻照誘變及輻照菌種的培養(yǎng)方法，其特征為¹²C⁺⁶重離子束輻照進(jìn)行誘變的劑量為50Gy。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的阿佛曼鏈霉菌種的重離子輻照誘變及輻照菌種的培養(yǎng)方法，其特征為斜面培養(yǎng)基及分離平板培養(yǎng)基配方：可溶性淀粉7g、葡萄糖5g、氯化鈉0.5g、硫酸銨2g、硫酸鎂1g、磷酸氫二鉀3g、輕質(zhì)碳酸鈣3g、瓊脂粉20g，加水定容至1000ml。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的阿佛曼鏈霉菌種的重離子輻照誘變及輻照菌種的培養(yǎng)方法，其特征為斜面培養(yǎng)基及分離平板培養(yǎng)基的制備方法如下：

(1)準(zhǔn)確稱量可溶性淀粉、葡萄糖、氯化鈉、硫酸銨、硫酸鎂、磷酸氫二鉀依次加入燒杯中，攪拌均勻后調(diào)節(jié)PH值至7.50；

(2)加入瓊脂粉攪拌均勻，加熱煮沸，待瓊脂充分溶解，加入輕質(zhì)碳酸鈣攪拌均勻，加水定溶至1000ml，再煮沸，趁熱分別分裝在試管中和三角瓶中；

(3)加棉塞包扎試管和三角瓶后，進(jìn)行120-123℃，20分鐘的高壓滅菌；

(4)斜面培養(yǎng)基的制備滅菌結(jié)束后，待培養(yǎng)基溫度降至50-60℃培養(yǎng)基在試管中制備成斜面，待瓊脂凝固后，置37℃的恒溫箱中空培6-7天，置入2-4℃冰箱保存等待菌種接種；

分離平板培養(yǎng)基的制備待三角瓶中的分離培養(yǎng)基溫度降至50-60℃時(shí)，趁熱在平皿上制備平板培養(yǎng)基，待瓊脂凝固后包扎，置37℃的恒溫箱中空培6-7天，置入2-4℃冰箱保存，等待菌種接種。