[發明專利]從蹄葉橐吾中制備具有抗癌抑菌活性倍半萜的方法

有效

• 申請號: 200810184480.6
• 申請日: 2008-12-25
• 公開（公告）號: CN101759675A
• 公開（公告）日: 2010-06-30
• 發明（設計）人: 師彥平;張文娟;戚歡陽
• 申請（專利權）人: 中國科學院蘭州化學物理研究所
• 主分類號: C07D307/92
• 分類號: C07D307/92;A61P35/00;A61K36/28
• 代理公司: 蘭州中科華西專利代理有限公司 62002
• 代理人: 方曉佳

技術領域

本發明涉及一種以菊科蹄葉橐吾植物為原料制備一種具有抗癌抑菌活性的倍半萜的方法。

背景技術

蹄葉橐吾【Ligularia?fischeri(Ledeb.)Turcz.】，又稱腎葉橐吾，系菊科橐吾屬多年生草本植物。廣泛分布于四川、湖北、貴州、湖南、河南、安徽、浙江、甘肅、陜西、華北及東北地區。其根和根莖作為山紫菀入藥，具有溫肺下氣、鎮咳祛痰、理氣活血、止痛、利尿、止血等功效，已收入吉林省地方藥品標準。

有研究表明，倍半萜類化合物I，化學名1α-氯-6β-異丁酰氧基-9-氧-10β-羥基-呋喃艾里莫芬倍半萜，對口腔上皮癌細胞生長顯示抑制活性，可預期作為抗腫瘤藥物用途。該倍半萜還明顯抑制金黃色葡萄球菌和乙型溶血性鏈球菌生長，可以預期用于防治此二者感染引起的癤子、膿疤、肺炎、骨髓炎、急性心肌炎、心內膜炎、腦膜炎、乳腺炎、膀肽炎、盆腔炎、泌尿道炎癥、前列腺炎、菌血癥、中毒性休克綜合癥、淋巴結炎、關節炎、咽炎、子宮頸炎，以及肌肉、皮膚、尿殖道、中樞神經系統的膿腫，有藥用開發的前景[李校堃，等.黑紫橐吾中的含氯原子艾里莫芬烷及其抗菌和細胞毒活性(P).2007年8月29日，公開號CN101024636A]。

發明內容

本發明的目的是提供一種制備具有抗癌抑菌活性倍半萜化合物I的方法。

我們在對蹄葉橐吾進行系統研究中，發現該植物原料中富含大量艾里莫芬烷型倍半萜類，其中化合物II的含量可達2.94％。我們對該化合物的制備工藝及結構改造進行了研究，發現由蹄葉橐吾制備的化合II，經過一步簡單的化學反應就可獲得化合物I的方法。該方法解決了化合物I在植物中含量低、難于獲得的問題，實現了快速、簡便、大量制備該化合物，為進一步的藥理學研究和藥物開發奠定了基礎。

由于該化合物在植物中的含量低、難于獲得或制備痕量，我們針對性的從菊科植物蹄葉橐吾原料中制備了其前體化合物II，并采用簡單的一步化學反應，將其轉化為目標化合物I，并考察了工藝條件，整個工藝適合于大量制備。

一種以蹄葉橐吾植物為原料，制備具有抗癌抑菌活性的倍半萜的方法，其特征在于采用以下A、B兩種方法中任意一種制備得到：

A、將蹄葉橐吾植物用溶劑提取得總浸膏，該浸膏(或用乙酸乙酯萃取所得部位浸膏)經過一步硅膠柱層析、混合溶劑梯度洗脫的方法，分離提純得化合物II；再將化合物II和稀鹽酸加熱反應，制備得到化合物I。

B、蹄葉橐吾植物總浸膏(或乙酸乙酯萃取部位浸膏)直接和稀鹽酸加熱反應，反應產物經過硅膠柱層析分離，直接收集化合物I的流分濃縮，即得化合物I粗品。

在上述各方法中，總浸膏提取時溶劑與原料的物料比在5∶1到10∶1范圍內，提取時如采用室溫下浸提，則每次7天，浸提3～4次；亦可采用加熱回流提取，每次2～3小時，提取3次；亦或采用超生提取等其它現有技術進行提取；提取溶劑可選擇80-95％(V/V)乙醇或甲醇、工業乙酸乙酯或丙酮等。

在上述各方法中，硅膠柱層析時選用的溶劑體系為石油醚和乙酸乙酯(20∶1到3∶1)或石油醚和丙酮(25∶1到5∶1)梯度洗脫。通過薄層層析檢測，收集石油醚和乙酸乙酯(5∶1)展開體系下，在254nm紫外光下有熒光、硫酸-乙醇顯藍色的組分，于＜50℃條件下減壓濃縮。

在上述各方法中，與稀鹽酸反應時的具體操作步驟為：將反應物溶解于少量乙醇或甲醇中，加入5％～10％鹽酸水溶液(鹽酸水溶液的用量約為反應物中化合物II含量的80～100倍)，加熱回流1～2h，反應完畢后稍冷置片刻，蒸去溶液中少量的乙醇或甲醇，用乙酸乙酯萃取，萃取液濃縮至干即可。

經上述各方法制備得到的化合物I粗品可通過以下步驟進行純化精制：通過一步硅膠柱層析純化，選用石油醚和乙酸乙酯(10∶1)或石油醚和丙酮(15∶1)溶劑洗脫，產品純度可達90％以上；亦可進一步重結晶，采用石油醚和丙酮或石油醚和乙酸乙酯溶劑體系，得到的產品晶型規則(無色塊晶)、熔點范圍窄(84～85℃)，純度可達95％以上。

本發明目標化合物提取轉化率為72.5％，解決了該化合物在天然界含量低、難于獲得的問題。且該方法具有操作簡便、成本低等優勢，生產的產品純度高，適宜作為標準品及醫藥開發使用。

具體實施方式

以下通過實施例來進一步說明本發明，但本發明并不局限于此實施例。

實施例1：化合物II的提取純化實驗

①蹄葉橐吾地下部分干燥植物110g，粉碎，用1000mL?95％乙醇加熱回流提取2小時，濾出提取液；共重復提取三次，合并提取液，減壓濃縮得總浸膏約13g。