[發明專利]膠體金免疫層析法檢測牛白血病抗體的試紙條及其制備方法

無效

• 申請號: 200810122729.0
• 申請日: 2008-06-26
• 公開（公告）號: CN101303351A
• 公開（公告）日: 2008-11-12
• 發明（設計）人: 宋陽威;張鑫宇;張常印;孫懷昌;吳亞力;何玲;張敬友
• 申請（專利權）人: 中華人民共和國徐州出入境檢驗檢疫局
• 主分類號: G01N33/558
• 分類號: G01N33/558;G01N33/531;G01N33/52
• 代理公司: 徐州市三聯專利事務所
• 代理人: 何君

1.一種膠體金免疫層析法檢測牛白血病抗體的試紙條的制備方法，包括牛 白血病病毒囊膜糖蛋白gp51體外表達、分離純化，其特征是：構建重組原核表 達載體pET-32a-gp51，在大腸桿菌中誘導表達GP51重組蛋白；所述的GP51重 組蛋白是由PCR法從BLV-FLK?DNA中成功擴增出牛白血病病毒囊膜糖蛋白gp51 基因，構建了gp51原核表達載體，重組蛋白主要以不溶性包涵體在大腸桿菌中 表達，表達的重組蛋白能被BLV陽性血清識別；經尿素變性和復性后，用Ni柱 純化法獲得單一的His-gp51融合蛋白條帶，將純化的His-gp51融合蛋白和羊抗 牛IgG點樣于硝酸纖維膜上，分別作為捕獲BLV抗體的檢測線和捕獲牛IgG的質 控線，將膠體金標記的羊抗牛IgG-Fc抗體吸附于玻璃纖維制成金標墊。