[發明專利]一種抗凝溶栓雙功能融合蛋白的凝膠層析復性方法有效
| 申請號： | 200810104966.4 | 申請日： | 2008-04-25 |
| 公開（公告）號： | CN101386639A | 公開（公告）日： | 2009-03-18 |
| 發明（設計）人： | 余蓉;高玲;蘇志國;張貴峰;梁蘭;陳凈;劉永東 | 申請（專利權）人： | 中國科學院過程工程研究所 |
| 主分類號： | C07K1/16 | 分類號： | C07K1/16;C07K1/14 |
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| 地址： | 100190北*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 抗凝 溶栓雙 功能 融合 蛋白 凝膠 層析 復性 方法 | ||
1.一種抗凝溶栓雙功能融合蛋白的凝膠層析復性方法，其特征在于以水蛭素12肽和瑞替普酶融合蛋白的包涵體為原料，變性溶解后得到融合蛋白的變性溶液，變性蛋白先在氧化復性緩沖液中進行氧化復性，然后在具有脲濃度梯度的層析介質為Superdex?G75的凝膠層析柱中進行層析復性，其中：
所說的水蛭素12肽和瑞替普酶融合蛋白的氨基酸序列為
MASDFEPIPEDAYDEGGGSYQGNSDCYFGNGSAYRGTHSLTESGASCLPWNSMILIGKVYTAQNPSAQAL
GLGKHNYCRNPDGDAKPWCHVLKNRRLTWEYCDVPSCSTCGLRQYSQPQFRIKGGLFADIASHPWQAAI
FAKHRRSPGERFLCGGILISSCWILSAAHCFQERFPPHHLTVILGRTYRVVPGEEEQKFEVEKYIVHKEFDD
DTYDNDIALLQLKSDSSRCAQESSVVRTVCLPPADLQLPDWTECELSGYGKHEALSPFYSERLKEAHVRL
YPSSRCTSQHLLNRTVTDNMLCAGDTRSGGPQANLHDACQGDSGGPLVCLNDGRMTLVGHSWGLGCG
QKDVPGVYTKVTNYLDWIRDNMRP；
所說的變性溶解包涵體的緩沖溶液組成為20-50mmol/L?Tris-HCl、6-8mol/L脲或3-7mol/L胍，含0.5-1mmol/L?DTT或1％-1.5％(v/v)β-巰基乙醇，pH8.5，變性溫度為37℃-40℃，變性時間為6-8h；
所說的氧化復性緩沖液組成為20-50mmol/L?Tris-HCl，6-8mol/L尿素或3-7mol/L胍，0.05-0.1mol/L?GSSG、0.5-0.9mol/L?L-Arg，pH?9.0-9.5，氧化復性溫度為25℃，時間為6-12h；
所說的在凝膠層析柱中進行層析復性的柱平衡及洗脫所用的緩沖液為20-50mmol/LTris-HCl，0.5-0.7mol/L?L-Arg，0.5-1.5mol/L?Urea，1-10mmol/L?GSH，1-10mmol/L?GSSG，1mmol/L?EDTA，pH?8.5。
2.按照權利要求1所述的抗凝溶栓雙功能融合蛋白的凝膠層析復性方法，其特征在于在層析柱中構建0.1-0.3柱體積長度的變性劑緩沖液。
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