[發(fā)明專利]一種天冬氨酸蛋白酶抑制劑的制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810096874.6
• 申請日: 2008-05-08
• 公開（公告）號: CN101275149A
• 公開（公告）日: 2008-10-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 田亞平;馬亞敏;劉琦
• 申請（專利權(quán)）人: 江南大學(xué)
• 主分類號: C12P1/02
• 分類號: C12P1/02;C12R1/645
• 代理公司: 無錫市大為專利商標(biāo)事務(wù)所
• 代理人: 時(shí)旭丹;劉品超

技術(shù)領(lǐng)域

一種天冬氨酸蛋白酶抑制劑的制備方法，具體地說是利用云芝發(fā)酵，反復(fù)凍融結(jié)合超聲波進(jìn)行細(xì)胞破碎，通過大孔樹脂脫色，DEAE離子交換層析，獲得較純的天冬氨酸蛋白酶抑制劑，屬于真菌發(fā)酵生物活性產(chǎn)品技術(shù)領(lǐng)域。

背景技術(shù)

在中國，隨著“純生熱”的不斷升溫，純生啤酒的泡沫穩(wěn)定性問題越來越受到生產(chǎn)廠家和研究者的關(guān)注。現(xiàn)有的研究證明，有活性的蛋白酶A及非活性的蛋白酶A前驅(qū)物的存在會直接或間接地破壞純生啤酒的泡沫蛋白，從而使純生啤酒的泡沫穩(wěn)定性降低，蛋白酶A及其前驅(qū)物的總量決定著降解成品啤酒中泡沫蛋白的綜合能力。

蛋白酶A的釋放途徑：PrA和其他蛋白酶在發(fā)酵和成熟階段從酵母細(xì)胞中釋放出來，酵母中蛋白酶A的釋放主要是破壞泡持性蛋白質(zhì)Z，而對純生啤酒的泡持性產(chǎn)生不良的影響。降低啤酒中蛋白酶A的途徑：第一種途徑是限制酶的產(chǎn)生和分泌。第二種途徑是控制或降低已經(jīng)從酵母分泌的蛋白酶活性，這可以添加蛋白酶A抑制劑或使蛋白酶A失活來實(shí)現(xiàn)。第三種途徑是通過基因工程技術(shù)構(gòu)建蛋白酶A缺失的啤酒酵母菌株。國外國內(nèi)對前期菌種和工藝方面都有一定的研究，但尚不能完全解決此問題，尤其是菌株方面，由于存在安全性問題以及公眾對基因技術(shù)的態(tài)度問題，尚需細(xì)致而深入的研究。而尋找特異的PrA抑制劑，作為一種后修飾的思路，正在引起人們的關(guān)注。但是直到目前為止，還沒有商業(yè)化的既安全又有效的蛋白酶A抑制劑可以在啤酒行業(yè)中使用。

蛋白酶A是一種天冬氨酸蛋白酶，天冬氨酸蛋白酶是一類重要的蛋白水解酶，參與機(jī)體的新陳代謝及生物調(diào)控作用。它的活性中心由兩個(gè)催化性天冬氨酸殘基組成。天冬氨酸蛋白酶包括：胃蛋白酶、HIV蛋白酶抑制劑、蛋白酶A、組織蛋白酶D、逆轉(zhuǎn)錄蛋白酶、血管緊張素轉(zhuǎn)化酶、天冬氨酸膜內(nèi)裂解蛋白酶等。深入了解天冬氨酸蛋白酶及其特異的抑制劑，對治療一些疾病如艾滋病、惡性腫瘤等世界上幾種難治的疾病都有一定的幫助，天冬氨酸蛋白酶在這些疾病的發(fā)病機(jī)制中都發(fā)揮了一定的作用，積極了解天冬氨酸蛋白酶的活化機(jī)制、作用位點(diǎn)特別是其抑制特性，將會有助于治療這些頑固性疾病。

蛋白酶抑制劑泛指對蛋白酶有抑制作用的一類物質(zhì)，參與生物體內(nèi)蛋白酶解活動的控制，對維持正常的生命活動具有重要意義。它的來源十分廣泛，在各種動植物的組織器官中都有存在。按其所抑制的目標(biāo)蛋白酶活性中心的不同，可分為以下幾種：絲氨酸蛋白酶抑制劑(Serpin)：如胰蛋白酶抑制劑；半胱氨酸蛋白酶抑制劑(Cys-C)：如木瓜蛋白酶抑制劑；天冬氨酸蛋白酶抑制劑：如HIV蛋白酶抑制劑、胃蛋白酶抑制劑、蛋白酶A抑制劑和血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)抑制劑；及金屬蛋白酶抑制劑等。目前國內(nèi)外報(bào)道的蛋白酶A抑制劑大多數(shù)都是通過化學(xué)法合成的，這些抑制劑在應(yīng)用中受到相當(dāng)大的限制；國外曾有人從馬鈴薯、番茄及豆科植物中提取出天冬氨酸族蛋白酶抑制劑；本實(shí)驗(yàn)室曾從靈芝發(fā)酵全粉中提到GLPIA1和GLPIA2兩種蛋白酶A抑制劑，并從馬鈴薯塊莖中提取一種蛋白酶A抑制劑。這些蛋白酶抑制劑在醫(yī)藥及食品添加劑等方面都有很好的應(yīng)用前景。

云芝是我國傳統(tǒng)的名貴藥材，富含豐富的營養(yǎng)及多種生物活性成分，具有藥用保健作用，是一種具有廣泛藥理活性的藥用真菌。云芝液體深層發(fā)酵的發(fā)酵產(chǎn)物復(fù)雜，主要為云芝多糖和云芝糖肽。

云芝多糖是良好的生物效應(yīng)調(diào)節(jié)劑，具有抑制腫瘤、調(diào)節(jié)免疫、降低放射、化療毒副反應(yīng)等多種藥理作用，并有抗艾滋病毒活性，能調(diào)節(jié)人體的免疫功能，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬作用；因射線等引起免疫功能低下者，云芝多糖能顯著提高其溶菌力；云芝多糖最重要的作用是它對肝臟的保護(hù)；云芝多糖對冠心病具有一定的治療作用、抗動脈粥樣硬化、提高鼠大腦皮層、肝組織的抗氧化作用，對頓抑心肌的功能和超微結(jié)構(gòu)有顯著保護(hù)作用，對慢性應(yīng)激引起的學(xué)習(xí)和記憶障礙有明顯的改善作用。

云芝糖肽是一種有效的免疫增強(qiáng)劑，抗腫瘤、鎮(zhèn)痛、免疫調(diào)節(jié)、抗缺氧、促進(jìn)多種細(xì)胞因子、抗乙肝病毒的產(chǎn)生；云芝或云芝糖肽與螺旋霉素合用，具有潛在的抗弓形蟲感染的效果。

利用云芝發(fā)酵制備天冬氨酸蛋白酶抑制劑，除了對天冬氨酸蛋白酶具有抑制作用外，還有云芝多糖和云芝糖肽等的活性功能，保證了其應(yīng)用的安全性，在醫(yī)藥保健及食品飲料等方面將有很好的應(yīng)用前景。

發(fā)明內(nèi)容