[發明專利]檢測受試者體液內疾病相關蛋白聚合能力的方法

無效

• 申請號: 200810096107.5
• 申請日: 2008-04-29
• 公開（公告）號: CN101308144A
• 公開（公告）日: 2008-11-19
• 發明（設計）人: 于順;陳彪;李雁;李堯華
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學宣武醫院
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543;G01N21/27
• 代理公司: 北京康信知識產權代理有限責任公司
• 代理人: 李丙林

相關申請的交叉引用

本申請要求于2007年5月16日向中國專利局提交的題為“檢測受試者體液內疾病相關蛋白聚合能力的方法”(申請號為200710107817.9)的優先權，將其全部內容結合于此作為參考。

技術領域

本發明涉及一種體外檢測受試者體液內疾病相關蛋白聚合能力的方法，更具體地說，涉及一種體外檢測帕金森病(PD)受試者體液(包括血清、血漿或腦脊液)內疾病相關蛋白如α-突觸核蛋白(也稱為α-Syn)的寡聚體形成能力的方法。

背景技術

帕金森病(PD)是常見的神經退行性疾病，在60歲以上人口的發病率高達2％，臨床上以靜止性振顫、運動徐緩、僵直和姿勢不穩定為主要癥狀。上述癥狀出現的主要原因是黑質多巴胺能神經元退變死亡，導致紋狀體多巴胺神經遞質釋放的減少。但是，從黑質多巴胺能神經元變性死亡開始到出現臨床癥狀為止需要有很長的潛伏期(推測需至少5年之久)，直到70％-80％的黑質多巴胺神經元丟失后才出現臨床癥狀。目前，PD的診斷主要依據臨床癥狀，但由于PD臨床癥狀的異質性，依據臨床癥狀的誤診率可以高達10-25％。腦功能影像如PET和SPECT無疑在PD的早期診斷、鑒別診斷和病程監控方面具有潛在的前景，但其特異性仍然有待于提高，此外，價格昂貴和放射性使這一技術的普遍應用受到限制。PD臨床癥狀雖然通過左旋多巴可以得到較好的糾正，然而，這些對癥治療不能阻止多巴胺神經元的進行性退變和死亡。因此，努力尋找能夠阻止或延緩多巴胺神經元退變和死亡的神經保護藥是PD治療的方向，然而神經保護藥的研發需要令人信服的、臨床上簡便易行的、能夠反映帕金森病病理變化嚴重程度的生物標記物。至今，在癥狀前和出現癥狀的病人中，還沒有容易進行的以血液、腦脊液或尿液分析為基礎的可靠檢測方法可以對PD進行診斷、早期診斷以及病理進程的監測。普通神經科醫生對于這種病的臨床診斷正確率大約在75％，運動障礙專家所做的診斷正確率大約在85％，這些充分表明了對這種診斷方法的需要。這種方法也有利于對運動障礙病人的早期治療和對神經保護藥物療效的生物監測和評價。

α-突觸核蛋白是一種小分子蛋白(～14KD)，在神經組織中的豐度較高，但也存在于其它組織、血液和腦脊液中。α-突觸核蛋白屬于突觸核蛋白家族(包括α-，β-和γ-突觸核蛋白)的成員，大量證據表明該蛋白與多種神經退行性疾病的發病相關，包括帕金森病、路易體癡呆、阿爾茲海默病、多系統萎縮。編碼α-突觸核蛋白基因的三個點突變(A53T、A30P及E46K)與家族性帕金森病的發病有關，并提示該蛋白在原發性PD的發病中起重要作用。此外，α-突觸核蛋白基因的二倍體和三倍體可以導致野生型α-突觸核蛋白的過表達，并引起家族性早發性PD。遺傳學分析顯示，α-突觸核蛋白的某些基因多態性是散發性PD的危險因素。纖維化的α-突觸核蛋白是PD特征性病理變化——路易體的主要成份。α-突觸核蛋白及其片段的病理性聚合和沉積也見于多種其它神經退行性疾病如阿爾茲海默病、路易體癡呆和多系統萎縮。有足夠的證據表明，腦內α-突觸核蛋白從可溶性的單體到不溶性的纖維的變化過程是PD和相關疾病的病理變化過程中的關鍵事件，其中，纖維化過程中形成的α-突觸核蛋白的寡聚體被證明對神經元具有毒性。

α-突觸核蛋白在PD的病理變化過程中的重要作用使其成為非常有希望的、潛在的、能夠反映PD病理變化嚴重程度的生物標記物。對腦脊液和血液中的α-突觸核蛋白的分析表明，PD病人和路易體癡呆病人血液與腦脊液中的α-突觸核蛋白的寡聚體的含量高于對照病人，但α-突觸核蛋白總含量的變化在不同實驗者之間得出相反的結果：Lee等利用雙抗體夾心的ELISA方法證明血液中α-突觸核蛋白的總含量在PD升高，而Li和Tokuda等分別用蛋白質印跡法(Western?blot)和ELISA方法證明血液和腦脊液中α-突觸核蛋白的總含量明顯降低，產生這種差別的原因尚不清楚。上述研究提示血液和腦脊液中的α-突觸核蛋白含量的變化作為PD診斷的生物標記物仍然需要進行大量的研究工作。我們認為，機體中存在促進和抑制α-突觸核蛋白聚合的因素，這些因素在PD病人的機體中朝向有利于α-突觸核蛋白寡聚體形成的方向，這些影響聚合的因素不僅存在于腦組織，而且也存在于體液中。因此，檢測體液(血液和腦脊液)促進α-突觸核蛋白聚合的綜合能力比直接檢測α-突觸核蛋白寡聚體的含量更能夠完整地反映患者的病理狀態。最近的一項研究支持這種推測：阿爾茲海默病人和路易體癡呆病人的腦脊液促進α-突觸核蛋白纖維的形成。