[發(fā)明專利]固定化蛋白酶及其在制備乳酪蛋白肽中的應(yīng)用方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810094030.8
• 申請日: 2008-04-28
• 公開（公告）號: CN101260397A
• 公開（公告）日: 2008-09-10
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 周利根;郜海燕;陳新峰;王君虹
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: C12N11/04
• 分類號: C12N11/04;C12P21/06
• 代理公司: 北京一格知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所
• 代理人: 鐘廷良;夏繼光

1、一種固定化蛋白酶，其特征在于，主要按照以下方法制備得到：

(1)將0.5～10％的殼聚糖酸性溶膠，攪拌，使溶膠液滴均勻分散，滴入體積分?jǐn)?shù)為2.5％的戊二醛溶液，使戊二醛溶液的最終濃度按體積分?jǐn)?shù)計為0.2-3.0％，攪拌加入0.5-3.0mol/L?NaOH溶液，至NaOH溶液的終濃度按體積分?jǐn)?shù)計為0.05％～3.0％，于40-70℃保溫反應(yīng)0.5-5.0小時，靜置冷卻后棄去上層，依次用丙酮、無水乙醇抽洗，最后用蒸餾水沖洗，真空干燥，得到固定化載體殼聚糖微球，備用；

(2)向濃度為0.1％～5.0％的蛋白酶溶液中加入固定化載體殼聚糖微球，其中，蛋白酶溶液與固定化載體殼聚糖微球按1-4∶1的重量比進行配比；振蕩吸附2-30小時，然后滴入體積分?jǐn)?shù)為2.5％戊二醛溶液，使戊二醛溶液的最終濃度按體積分?jǐn)?shù)計為0.2-3.0％，交聯(lián)0.2-10.0小時，即得。

2、按照權(quán)利要求1所述的固定化蛋白酶，其特征在于：所述的蛋白酶選自木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、胰蛋白酶、中性蛋白酶、動物蛋白水解酶、堿性蛋白酶或胃蛋白酶中的任意一種或一種以上按任意比例所組成的復(fù)合酶。

3、由權(quán)利要求1或2所述的固定化蛋白酶制備得到的固定化蛋白酶柱。

4、權(quán)利要求3所述的固定化蛋白酶柱在制備乳清蛋白肽中的應(yīng)用，包括：(1)預(yù)處理乳酪蛋白溶液；(2)將經(jīng)過預(yù)處理的乳酪蛋白溶液流過所述的固定化蛋白酶柱，進行酶水解反應(yīng)；(3)收集酶水解液，離心分離，得上清液；(4)將上清液脫色處理后再進行脫鹽處理；(5)將脫鹽處理后的酶解液進行納濾處理；(6)濃縮；(7)濃縮后的產(chǎn)物包埋于壁材中；(8)噴霧干燥。

5、按照權(quán)利要求4的應(yīng)用，其特征在于：步驟(1)中所述的預(yù)處理為：將乳酪蛋白配制成濃度為1.0-6.0mg/mL的溶液在60-100℃溫度條件下預(yù)熱處理5-20分鐘，然后將乳酪蛋白溶液冷卻至30-60℃。

6、按照權(quán)利要求4的應(yīng)用，其特征在于：步驟(2)中經(jīng)過預(yù)處理的濃度為1.0-6.0mg/mL的乳酪蛋白溶液以0.1-5.0mL/min的流速過固定化蛋白酶柱；所述的酶水解反應(yīng)條件為：溫度30-65℃，pH為4.0-9.0。

7、按照權(quán)利要求4的應(yīng)用，其特征在于：步驟(4)中所述的脫色處理在以下條件下進行：將離心上清液pH調(diào)整至6.0-7.0，加入上清液重量0.5-3.0％的活性炭粉末或顆粒，于30-50℃條件下進行脫色處理，1.0-3.0小時后過濾分離。

8、按照權(quán)利要求4的應(yīng)用，其特征在于：步驟(4)中所述的脫鹽處理在以下條件下進行：經(jīng)脫色處理的乳酪蛋白酶解液采用浸泡法或過柱法，先經(jīng)24g/100mL的強酸性苯乙烯系陽離子交換樹脂，處理30分鐘后，后經(jīng)24g/100mL的強堿性苯乙烯系陰離子交換樹脂處理30分鐘，進行脫鹽處理。

9、按照權(quán)利要求4的應(yīng)用，其特征在于：步驟(5)中所述的納濾處理在以下條件下進行：采用NF-1即截留分子量為2000的納濾膜，操作壓力0.3-1.0Mpa，截留分離分子量范圍小于2000的乳酪蛋白肽。

10、按照權(quán)利要求4的應(yīng)用，其特征在于：步驟(6)中所述的濃縮按照以下條件進行：控制真空度為600-750mmHg，在蒸發(fā)溫度60-70℃條件下，將乳酪蛋白肽溶液濃縮至固形物含量為10-30％；通過真空蒸發(fā)濃縮，得到高含量的乳酪蛋白肽溶液；步驟(7)中所述的壁材由多孔淀粉與β-環(huán)糊精復(fù)合而成。