[發明專利]一種CK19重組腺相關病毒載體及其構建方法與應用

無效

• 申請號: 200810093222.7
• 申請日: 2008-04-23
• 公開（公告）號: CN101307328A
• 公開（公告）日: 2008-11-19
• 發明（設計）人: 劉勇;保羅·L·赫蒙納特
• 申請（專利權）人: 廣州博沃津生物技術有限公司
• 主分類號: C12N15/86
• 分類號: C12N15/86;C12N15/12;C12N7/01;C12N5/10;A61K38/17;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司
• 代理人: 魯兵

技術領域

本發明涉及載體及其應用，特別是涉及一種重組腺相關病毒載體及其構建方法與 其在制備抗腫瘤藥物中的應用。

背景技術

腺相關病毒(AAV)的基因結構已經被鑒定。1983年，Samulski等人描述了AAV的 末端重復片段(上游5’端片段，下游3’端片段)(Samulski?RJ，Srivastava?A，Berns KI，Muzyczka?N.Rescue?of?adeno-associated?virus?from?recombinant?plasmids： gene?correction?within?the?terminal?repeats?of?AAV.Cell.33：135-143.)。 1984年，Hermonat等人描述了AAV的低感染顆粒(lip)基因和包膜(cap)基因 (Hermonat?PL，Labow?MA，Wright?R，Berns?KI，Muzyczka?N.Genetics?of adeno-associated?virus：isolation?and?preliminary?characterization?of adeno-associated?virus?type?2?mutants.J?Virol.51：329-339.Hermonat，P.L.， and?Muzyczka，N.Use?of?adeno-associated?virus?as?a?mammalian?DNA?cloning vector：transduction?of?neomycin?resistance?into?mammalian?tissue?culture cells.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81：6466-6470.)。1986年，Labow等人 鑒定了位于上游5’端片段和rep基因之間的p5啟動子(Labow?MA，Hermonat?PL，Berns KI.Positive?and?negative?autoregulation?of?the?adeno-associated?virus?type 2?genome.J?Virol.160：251-258.)。

1984年，美國博沃基因國際有限公司的主要技術技術負責人之一Paul?L. Hermonat教授率先證明AAV載體可用于人類疾病的基因治療(Hermonat，P.L.，and Muzyczka，N.Use?of?adeno-associated?virus?as?a?mammalian?DNA?cloning?vector： transduction?of?neomycin?resistance?into?mammalian?tissue?culture?cells.Proc. Natl.Acad.Sci.U.S.A.81：6466-6470.)。目前，主要是歐美國家在進行以AAV 為基礎的基因治療人類疾病的臨床試驗。據美國糧食和藥品管理局統計，現有十余項 以AAV為基礎的基因治療臨床試驗正在進行，主要是將攜帶治療基因的AAV病毒注入 患者體內，使其在體內表達治療基因，從而達到治療疾病的目的。主要針對治療的疾 病有帕金森氏綜合癥、風濕性關節炎、血友病、心力衰竭、進行性肌萎縮和奧茲海默 綜合癥等非腫瘤性疾病。但是，應用于臨床治療的AAV病毒仍存在一些問題，例如攜 帶治療基因大小受到明顯限制，病毒本身不穩定，導致治療基因表達不穩定，以及造 成療效不一致。雖然AAV病毒本身的免疫原性很弱，但所表達的治療基因容易在患者 體內誘發自身免疫反應，甚至導致嚴重的毒副作用。