[發(fā)明專利]一種利用糞便中SFRP2基因超甲基化篩查大腸癌的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810089594.2
• 申請日: 2008-04-09
• 公開（公告）號: CN101250588A
• 公開（公告）日: 2008-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王道榮;湯東
• 申請（專利權(quán)）人: 王道榮;湯東
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.?一種利用糞便中SFRP2基因超甲基化篩查大腸癌的方法，其特征是通過以下步驟實(shí)現(xiàn)的：

(1)糞便DNA從糞便標(biāo)本用QIAamp?DNA?Stool?Mini?Kit分離DNA，置于-70--85℃保存?zhèn)溆茫?/p>

(2)取500ng-2μg的基因組DNA放在容器中，用終濃度為0.15-0.25mol/L的NaOH在36-37.5℃中變性14-17分鐘；添加30μL的9-11mmol/L的對苯二酚和520μL的2.0-3.5mol/L的NaHSO₃，pH4.9-5.1，混合物在50-60℃下培養(yǎng)15-18小時；重亞硫酸鹽修飾的DNA用Wizard?DNA?Cleanup?kit純化；DNA用NaOH在室溫下培養(yǎng)14-17分鐘脫磺酸基，終濃度為0.25-.035mol/L，用醋酸氨中和，PH為6.5-7.3，終濃度為0.3mol/L；DNA用乙醇沉淀回收，用蒸餾水稀釋到終濃度為4.5-5.5ng/μL；3μL的重亞硫酸鹽修飾的DNA和從80μL提取出的等量的DNA用來擴(kuò)增；PCR在反應(yīng)容器中進(jìn)行，包括17.875μL的ddH2O、2.5μL的10×PCR?Buffer、2μL的dNTP?Mixture、0.25μL的Forward?Primer、0.25μL的Reverse?Primer、2μL的Template和0.125μL的TaKaRa?Taq?HS，在以下條件下進(jìn)行：93-97℃變性5分鐘進(jìn)入循環(huán)，循環(huán)溫度及時間為93-97℃，25-35秒；退火溫度：U型引物45-55℃，M型引物60-64℃，25-30秒；70-75℃，25-35秒，共40個循環(huán)，70-75℃延長5分鐘；

(3)進(jìn)行電泳分析，根據(jù)電泳圖，得出甲基化結(jié)果；根據(jù)MSP原理判定有無腫瘤存在。

2.?根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種篩查大腸癌的方法，其特征在于：所述判斷的標(biāo)準(zhǔn)為糞便中SFRP2基因是否發(fā)生甲基化。