[發明專利]高純度脂肽、脂肽膠束及其制備方法

有效

• 申請號: 200810087401.X
• 申請日: 2001-01-18
• 公開（公告）號: CN101240013A
• 公開（公告）日: 2008-08-13
• 發明（設計）人: T·J·凱萊赫;賴正吉;J·P·德庫西;P·D·林奇;M·澤諾尼;A·R·塔利亞尼
• 申請（專利權）人: 卡比斯特制藥公司
• 主分類號: C07K1/18
• 分類號: C07K1/18;C07K1/20;C07K7/64;C12P21/00;C12R1/465
• 代理公司: 中國國際貿易促進委員會專利商標事務所
• 代理人: 唐曉峰

1.純化達托霉素的方法，

包括以下步驟：

a)提供脫水-達托霉素和β-異構體總量至少為2.5％的達托霉素制劑；

b)在有改良緩沖液的情況下使達托霉素制劑結合在陰離子交換樹脂上，條件是使達托霉素以單體和非膠束狀態結合在陰離子交換樹脂上；

c)在有改良緩沖液的情況下清洗陰離子交換樹脂，條件是洗脫脫水-達托霉素但保留達托霉素；

d)在有改良緩沖液的情況下在可使達托霉素與達托霉素β-異構體分離的條件下洗脫達托霉素；

e)得到至少95％純的達托霉素，或至少98％純的達托霉素，或僅含1％脫水-達托霉素和1％達托霉素β-異構體的達托霉素、或僅含0.5％脫水-達托霉素和1％達托霉素β-異構體的達托霉素、或僅含0.01％脫水-達托霉素和1％達托霉素β-異構體的達托霉素、或僅含1％雜質1-14之一的達托霉素，或僅含0.5％圖12所示峰1-14定義的任一種雜質的達托霉素。

2.權利要求1所述的方法，其中的陰離子交換樹脂是PorosD50或PorosP150。

3.權利要求1或2所述的方法，其中的離子改良緩沖液含有摩爾濃度為2-6M的尿素，pH為6.0?7.0。

4.權利要求1所述的方法，還包括過濾和濃縮洗脫的達托霉素的步驟。

5.純化達托霉素的方法，包括以下步驟：

a)用正癸酸原料發酵玫瑰孢鏈霉菌，在發酵肉湯中產生達托霉素；

b)澄清發酵肉湯，得到澄清的溶液；

c)使澄清溶液經過陰離子交換色譜法以得到富含達托霉素的制劑；

d)使富集的達托霉素制劑經過疏水相互作用色譜法以得到半純化的達托霉素制劑；并且

e)使半純化的達托霉素制劑經過改良緩沖液增強的陰離子交換色譜法以得到至少95％純的達托霉素，或至少98％純的達托霉素，或僅含1％脫水-達托霉素和1％達托霉素β-異構體的達托霉素、或僅含0.5％脫水-達托霉素和1％達托霉素β-異構體的達托霉素、或僅含0.01％脫水-達托霉素和1％達托霉素β-異構體的達托霉素、或僅含1％雜質1-14之一的達托霉素，或僅含0.5％圖12所示峰1-14定義的任一種雜質的達托霉素。

6.根據權利要求5所述的方法，其中步驟a)調節正癸酸以達到發酵過程中正癸酸的剩余濃度為每百萬份中不大于50份(ppm)。

7.根據權利要求5所述的方法，其中步驟b)所述的澄清包括用含有丁醇的緩沖液提取發酵肉湯。

8.根據權利要求5所述的方法，其中步驟c)的陰離子交換色譜法在FP-DA13樹脂上進行。

9.根據權利要求5所述的方法，其中步驟d)的疏水相互作用色譜法在HP-20ss樹脂上進行。

10.根據權利要求9所述的方法，其中疏水相互作用色譜法在pH6.0-7.0下進行，并且溶劑濃度低于在pH4.0-5.0下進行疏水相互作用色譜法時所用的溶劑濃度。

11.根據權利要求10的方法，其中用10-20％濃度乙腈洗脫半純化的達托霉素。

12.根據權利要求10的方法，其中用20-25％濃度異丙醇洗脫半純化的達托霉素。

13.根據權利要求10，11或12所述的方法，其中通過改變樹脂的pH，不經過除去溶劑的步驟而回收HP-20ss樹脂。

14.根據權利要求5所述的方法，其中步驟e)的改良緩沖液增強的陰離子交換色譜法在PorosD50或Poros150樹脂上進行。

15.根據權利要求14所述的方法，其中步驟e)的改良緩沖液增強的陰離子交換色譜法包括以下步驟：

i)將步驟d)得到的半純化的達托霉素制劑置于適于改良緩沖液增強的陰離子交換色譜法的緩沖液中；

ii)在有改良緩沖液的情況下將達托霉素制劑結合到陰離子交換樹脂上，條件是使其中的達托霉素以單體和非膠束的狀態結合到陰離子交換樹脂上；

iii)在有改良緩沖液的情況下清洗陰離子交換樹脂，條件是洗脫脫水-達托霉素而保留達托霉素；并且

iv)在有改良緩沖液的情況下洗脫達托霉素，條件是使達托霉素與β-異構體分離。