[發明專利]一種從鹿茸提取胰島素樣生長因子(IGF-1)的方法無效
| 申請號： | 200810084902.2 | 申請日： | 2008-03-07 |
| 公開（公告）號： | CN101525371A | 公開（公告）日： | 2009-09-09 |
| 發明（設計）人： | 張新宇;劉越;劉洋;袁婧婷 | 申請（專利權）人： | 北京前沿科學研究所 |
| 主分類號： | C07K1/14 | 分類號： | C07K1/14;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/16 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 100029北京市朝陽區裕*** | 國省代碼： | 北京;11 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 鹿茸 提取 胰島素 生長因子 igf 方法 | ||
1、一種從鹿茸提取胰島素樣生長因子IGF-1的方法，其特征是包含如下步驟：
(1)、粉碎：取鮮鹿茸，在低溫下粉碎，溫度4-10℃，過80目篩；
(2)、超聲波提取：將粉碎后的鹿茸用體積/重量為3-10倍的pH9-12的緩沖液進行提取，優選pH10的緩沖液，優選5-9倍，最優選7倍；溫度4-30℃，優選10-25℃，最優選20℃；時間10-60min，優選15-30min，最優選15-20min；提取1-2次；
(3)、高速離心分離：提取液于高速離心機中5000-10000轉離心20min，沉淀部分加入2-5倍的緩沖液，重復上述操作，合并兩次離心所得上清液；
(4)、超濾：將上清液用膜進行超濾，去除小分子物質和大分子物質，并對上清液進行濃縮，得濃縮液，膜的截留值為1-100kDa，優選6-20kDa；
(5)、離子交換層析：將超濾上清液調pH至5-7，優選6.8，上陽離子交換柱，梯度洗脫，先用pH5-7，優選6.8，的緩沖液洗脫，優選磷酸鹽緩沖液，再用含0.4-0.6mol/l(優選0.5mol/l)的NaCl的pH5-7(優選pH6.8)緩沖溶液(優選磷酸鹽緩沖液)，再用含0.7-0.9mol/lNaCl(優選0.8mol/l)的pH?7-8(優選pH7.6)緩沖溶液(優選磷酸鹽緩沖液)梯度洗脫，再用含0.9-1.1mol/l的NaCl(優選1.0mol/l)的pH?8-10(優選9.0)緩沖溶液(優選Tris-HCl緩沖液)梯度洗脫，收集胰島素樣生長因子IGF-1的峰；離子交換層析柱優選CM?Sephadex?C-50柱；
(6)、超濾：用1-100kDa(優選2-6kDa)的超濾膜將步驟(5)得到的胰島素樣生長因子-1洗脫液進行脫鹽、濃縮，收集洗脫液；
(7)、冷凍干燥：將步驟(6)所得濃縮液進行冷凍干燥，得到凍干粉。
2、一種如權利要求1所述從鹿茸提取胰島素樣生長因子IGF-1的方法，其特征是還包含如下步驟：
(8)、凝膠色譜純化：將步驟(6)所得濃縮液，或者步驟(7)所得到的凍干粉溶于pH8-10緩沖溶液中，優選9.0，上凝膠排阻色譜柱，以pH?8-10優選9.0緩沖溶液(優選Tris-HCl緩沖液)洗脫，收集胰島素樣生長因子IGF-1的峰，凝膠排阻色譜柱優選Sephadex?G-50；
(9)、超濾：用1k-100kDa(優選2-6kDa)的超濾膜將步驟(8)得到的胰島素樣生長因子IGF-1洗脫液進行脫鹽、濃縮，收集洗脫液；
(10)、冷凍干燥：將步驟9所得濃縮液進行冷凍干燥，得到凍干粉；凍干粉中IGF-1純度可達98％以上，滿足藥品原料的要求。
3、一種如權利要求1、2所述從鹿茸提取胰島素樣生長因子IGF-1的方法，其特征是包含如下步驟：
(1)、粉碎：取鮮鹿茸，在低溫下粉碎，溫度4-10℃，過80目篩；
(2)、超聲波提取：將粉碎后的鹿茸用體積/重量為7倍的pH10的緩沖液進行提取，；溫度20℃；時間15-20min；提取2次；
(3)、高速離心分離：提取液于高速離心機中5000-10000轉離心20min，沉淀部分加入2-5倍的緩沖液，重復上述操作，合并兩次離心所得上清液；
(4)、超濾：將上清液用膜進行超濾，去除小分子物質和大分子物質，并對上清液進行濃縮，得濃縮液，膜的截留值為6-20kDa；
(5)、離子交換層析：將超濾上清液調pH至6.8，上陽離子交換柱，梯度洗脫，先用pH?6.8的磷酸鹽緩沖液洗脫，再用含0.5mol/l的NaCl的pH6.8磷酸鹽緩沖溶液洗脫，再用含0.8mol/lNaCl的pH7.6磷酸鹽緩沖液洗脫，再用含1.0mol/l的NaCl的pH?9.0Tris-HCl緩沖液梯度洗脫，收集胰島素樣生長因子IGF-1的峰；離子交換層析柱為CM?Sephadex?C-50柱；
(6)、超濾：用6-20kDa的超濾膜將步驟(5)得到的胰島素樣生長因子-1洗脫液進行脫鹽、濃縮，收集洗脫液；
(7)、冷凍干燥：將步驟(6)所得濃縮液進行冷凍干燥，得到凍干粉；
(8)、凝膠色譜純化：將步驟(6)所得濃縮液，或者步驟(7)所得到的凍干粉溶于pH9.0Tris-HCl緩沖溶液中，上凝膠排阻色譜柱，以pH?9.0Tris-HCl緩沖液洗脫，收集胰島素樣生長因子-1的峰，凝膠排阻色譜柱為Sephadex?G-50；
(9)、超濾：用2-6kDa的超濾膜將步驟(8)得到的胰島素樣生長因子IGF-1洗脫液進行脫鹽、濃縮，收集洗脫液；
(10)、冷凍干燥：將步驟9所得濃縮液進行冷凍干燥，得到凍干粉；凍干粉中IGF-1純度可達98％以上，滿足藥品原料的要求。
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