[發明專利]HCV抗體測定用試劑盒及HCV抗體測定方法

有效

• 申請號: 200810084715.4
• 申請日: 2008-03-14
• 公開（公告）號: CN101266249A
• 公開（公告）日: 2008-09-17
• 發明（設計）人: 一井正城;松原俊介
• 申請（專利權）人: 希森美康株式會社
• 主分類號: G01N33/576
• 分類號: G01N33/576;G01N33/543
• 代理公司: 北京金之橋知識產權代理有限公司
• 代理人: 梁朝玉;劉良勇

技術領域：

本發明涉及一種丙型肝炎病毒(HCV)抗體的測定用試劑盒及測定方法。

背景技術：

丙型肝炎是一種由丙型肝炎病毒(HCV)引起的傳染性疾病。

HCV是具有全長9.5kb的單鏈(+鏈)RNA基因組的病毒，其基因組結構由5′端非翻譯區、翻譯區及3′端非翻譯區構成。

由約3000個氨基酸殘基構成的翻譯區中有對應于核心蛋白質和包膜蛋白質(E1，E2)這二個結構蛋白質的域。還有對應于NS2、NS3、NS4、NS5這些非結構蛋白質的域。

作為HCV的檢測方法已知有檢測標本中與HCV抗原相對應的抗體(HCV抗體)的免疫學方法。這種方法通常是檢測試劑中的HCV抗原與標本中的HCV抗體結合生成的抗原-抗體復合物。HCV抗體的免疫學檢測中使用含有對應于各種HCV蛋白質序列的HCV抗原，以便能夠檢測出能識別不同種類的HCV蛋白質的多種HCV抗體。眾所周知，HCV抗原有由天然材料分離出來的物質和通過基因重組法和化學合成法等方法生產出來的物質。作為這種HCV抗原比如有美國專利第5350671號、美國專利第5910404號和美國專利第5308750號等公開的東西。

用于免疫學檢測HCV抗體的傳統的試劑盒都含有固定于固相上的數種HCV抗原。讓這些抗原與標本中的HCV抗體反應，在該固相上生成抗原-抗體復合物，檢測復合物，以此來測定HCV抗體。

發明內容：

本發明的發明人在研究使用HCV合成肽抗原和HCV基因重組抗原的HCV抗體測定用試劑的過程中，就含這些抗原的試劑的穩定性和反應性進行了探討。結果發現，HCV合成肽抗原和HCV基因重組抗原其穩定性和反應性不同。

本發明提供一種HCV抗體測定用試劑盒，包括：含有附加了固相結合位點的HCV合成肽抗原的第一試劑和含有固定有HCV基因重組抗原和能結合到所述固相結合位點的結合物質的固相的第二試劑。

本發明還提供一種HCV抗體測定用試劑盒，包括：含有附加了固相結合位點的HCV合成肽抗原的第一試劑和含有固定有HCV基因重組抗原的第一固相和固定有可結合到所述固相結合位點的結合物質的第二固相的第二試劑。

所述HCV合成肽抗原以游離狀態存在于第一試劑中。

所述HCV基因重組抗原含有HCV非結構蛋白質肽。

所述HCV基因重組抗原至少是選自以基因重組NS3抗原、基因重組NS4抗原、基因重組NS5抗原和基因重組核心抗原構成的族群的一種；所述HCV合成肽抗原至少是選自以合成肽NS4抗原、合成肽NS5抗原和合成肽核心抗原構成的族群的一種。

所述第一試劑含有與所述HCV合成肽抗原不同種類的第二HCV合成肽抗原，所述第二HCV合成肽抗原含有能與所述結合物質結合的固相結合位點。所述HCV合成肽抗原含有HCV結構蛋白質肽，所述第二HCV合成肽抗原含有HCV非結構蛋白質肽。所述HCV合成肽抗原是核心抗原，所述第二HCV合成肽抗原是NS4抗原或NS5抗原，所述HCV基因重組抗原是NS3抗原。

所述第一固相和第二固相是磁性粒子、膠乳粒子或微量滴定板的微孔。

所述固相結合位點含生物素，所述結合物質是抗生朊類。

所述的試劑盒還包括含有被標記物標記且能與HCV抗體結合的物質的第三試劑。所述能與HCV抗體結合的物質是抗體。所述標記物是酶，還包括含有與所述酶相對的底物的第四試劑。

本發明提供一種HCV抗體測定方法，包括：接觸步驟，讓標本、含有附加了固相結合位點的HCV合成肽抗原的第一試劑和含有固定有HCV基因重組抗原和能結合到所述固相結合位點的結合物質的固相的第二試劑接觸；及檢測步驟，檢測在固相上形成的HCV合成肽抗原與HCV抗體的第一復合物及/或HCV基因重組抗原與HCV抗體的第二復合物。

本發明提供另一種HCV抗體測定方法，包括：接觸步驟，讓標本、含有附加了固相結合位點的HCV合成肽抗原的第一試劑和含固定有HCV基因重組抗原的第一固相和固定有可結合到所述固相結合位點的結合物質的第二固相的第二試劑接觸；及檢測步驟，檢測在所述第二固相上形成的HCV合成肽抗原與所述標本中所含HCV抗體的第一復合物及/或在所述第一固相上形成的HCV基因重組抗原與所述標本所含HCV抗體的第二復合物。

本發明提供的HCV抗體測定用試劑盒，其用于測定的各種HCV抗原保存穩定性優越，且與抗體的反應性好，使長時間進行準確測定成為可能。使用本發明提供的HCV抗體測定用試劑盒可以防止HCV抗原保存穩定性低下造成的測定靈敏度下降，從而可以進行更精確的測定。

附圖說明：