[發明專利]修飾有核苷酸的微小管的合成方法和保存方法

無效

• 申請號: 200810082627.0
• 申請日: 2008-02-27
• 公開（公告）號: CN101265287A
• 公開（公告）日: 2008-09-17
• 發明（設計）人: 檜山聰;森谷優貴;須田達也;須藤和夫
• 申請（專利權）人: 株式會社NTT都科摩;國立大學法人東京大學
• 主分類號: C07K1/107
• 分類號: C07K1/107
• 代理公司: 北京三友知識產權代理有限公司
• 代理人: 丁香蘭

1.一種修飾有核苷酸的微小管的合成方法，該方法包括如下步驟：使聚合后已穩定的微小管與具有琥珀酰亞胺和馬來酰亞胺的化學交聯劑、以及3’末端或5’末端被巰基化的核苷酸反應，合成出微小管-化學交聯劑-核苷酸復合體，所述方法的特征在于，該方法包括如下步驟：

使所述已穩定的微小管的氨基與所述化學交聯劑的琥珀酰亞胺反應，合成出微小管-化學交聯劑復合體；和

使所述微小管-化學交聯劑復合體的馬來酰亞胺與所述核苷酸反應，合成出所述微小管-化學交聯劑-核苷酸復合體。

2.如權利要求1所述的修飾有核苷酸的微小管的合成方法，其特征在于，所述化學交聯劑選自MBS、Sulfo-MBS、SMPB、Sulfo-SMPB、GMBS、Sulfo-GMBS、EMCS和Sulfo-EMCS中，其中所述MBS為間馬來酰亞胺苯甲酰-N-羥基琥珀酰亞胺酯、所述Sulfo-MBS為間馬來酰亞胺苯甲酰-N-羥基琥珀酰亞胺酯磺酸鈉、所述SMPB為4-(對馬來酰亞胺苯基)丁酸琥珀酰亞胺酯、所述Sulfo-SMPB為4-(對馬來酰亞胺苯基)丁酸琥珀酰亞胺酯磺酸鈉、所述GMBS為N-(γ-馬來酰亞胺丁酰氧基)琥珀酰亞胺酯、所述Sulfo-GMBS為N-(γ-馬來酰亞胺丁酰氧基)琥珀酰亞胺酯磺酸鈉、所述EMCS為N-(ε-馬來酰亞胺己酰氧基)琥珀酰亞胺酯、所述Sulfo-EMCS為N-(ε-馬來酰亞胺己酰氧基)琥珀酰亞胺酯磺酸鈉。

3.如權利要求1所述的修飾有核苷酸的微小管的合成方法，其特征在于，所述核苷酸為具有單鏈部分的脫氧核糖核酸或核糖核酸，其中所述脫氧核糖核酸表示為DNA，所述核糖核酸表示為RNA。

4.一種修飾有核苷酸的微小管的保存方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：

利用權利要求1～3任一項所述的修飾有核苷酸的微小管的合成方法合成出微小管-化學交聯劑-核苷酸復合體；

通過將所述微小管-化學交聯劑-核苷酸復合體的溶液進行冷卻或者向所述復合體的溶液中加入解聚劑，使修飾有核苷酸的微小管解聚，以制成修飾有核苷酸的微管蛋白；和

將所述修飾有核苷酸的微管蛋白急速冷凍來進行保存。

5.如權利要求4所述的修飾有核苷酸的微小管的保存方法，其特征在于，所述方法還包括如下步驟：在進行所述急速冷凍之前，將所述修飾有核苷酸的微管蛋白的聚合和所述修飾有核苷酸的微小管的解聚重復進行2次以上。

6.一種修飾有核苷酸的微小管的再合成方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：

利用權利要求4或5所述的修飾有核苷酸的微小管的保存方法，將修飾有核苷酸的微管蛋白急速冷凍來進行保存；

在所述的經急速冷凍的修飾有核苷酸的微管蛋白的溶液中混合鳥嘌呤核苷三磷酸和鎂離子，以得到混合溶液，其中鳥嘌呤核苷三磷酸表示為GTP；和

將所述混合溶液加熱，使所述修飾有核苷酸的微管蛋白再聚合，由此再合成出所述修飾有核苷酸的微小管。

7.如權利要求6所述的修飾有核苷酸的微小管的再合成方法，其特征在于，所述方法還包括如下步驟：向所述混合溶液中添加未修飾有核苷酸的野生型微管蛋白。

8.如權利要求6所述的修飾有核苷酸的微小管的再合成方法，其特征在于，所述方法還包括如下步驟：向所述混合溶液中添加修飾有核苷酸的微管蛋白，其中所述修飾有核苷酸的微管蛋白具有與所述經急速冷凍的修飾有核苷酸的微管蛋白不同的堿基序列。