[發明專利]山羊S6K2基因cDNA編碼區核苷酸序列

無效

• 申請號: 200810080505.8
• 申請日: 2008-02-05
• 公開（公告）號: CN101503695A
• 公開（公告）日: 2009-08-12
• 發明（設計）人: 王志鋼;劉東軍;旭日干
• 申請（專利權）人: 王志鋼;劉東軍;旭日干
• 主分類號: C12N15/54
• 分類號: C12N15/54;C12N15/10;C12N9/12
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• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及從山羊肌肉細胞分離的編碼S6K2蛋白的cDNA，更具體地說涉及編碼S6K2蛋白質的cDNA編碼區477bp的核苷酸序列和與它對應的氨基酸序列。

背景技術

細胞生長調控是一個受多因素影響的復雜過程，它不僅受到時間和空間的限制，還受到營養條件和細胞內外環境條件的影響。在營養條件合適并有其它刺激生長的因子存在時，細胞通過生物大分子合成而使得質量和形態都得到增長，此時則表現為生長。盡管目前對細胞生長和細胞周期分裂是如何協調的機制理解的還很少，但信號蛋白TOR(target?of?rapamycin)在從酵母到果蠅直至哺乳動物細胞中作為細胞生長的中心協調器的作用已為人們所認識，這一在進化上保守的協調器調節著基本的生物加工過程。最具特色的mTOR下游效應器包括兩條信號通路，即4E-BP1(真核細胞翻譯啟始因子4E(eIF4E)結合蛋白1)和S6Ks(核糖體蛋白S6激酶)，形成了兩條平行的調節mRNA轉譯的信號通路。

哺乳動物細胞中有兩種S6Ks蛋白，即S6K1和S6K2，它們分別由兩個基因所編碼。兩種蛋白在組成、結構和功能等方面都是相近的。S6K2是一個屬于AGC激酶家族的Ser/Thr激酶。S6K2蛋白包含了5個主要的結構域，自N端始分別為NT(N-terminal?domain)，catalytic?domain，the?linker?region，autoinhibitorydomain和CT(C-terminal?domain)。S6K2有兩種形態，分別稱為S6K2β1(p70β1)和S6K2β2(p70β2)。人的S6K2β1含有495個氨基酸殘基，S6K2β2含有482個氨基酸殘基，二者僅在N端相差13個氨基酸并且在S6K2β1多出的13個氨基酸中包含了核定位信號。編碼p70β和p70α的基因核苷酸序列的同源性為70％，而氨基酸序列同源性為85％，進一步的結構分析表明，在S6K2的C端也有核定位信號，故S6K2的兩種形態都是核型的。實驗證明S6K2在小鼠細胞生長和胚胎發育中起著重要的作用，S6K2影響著蛋白的合成和細胞的生長。

迄今，關于S6K2在哺乳動物細胞生長與增殖中發揮調節作用的研究已在人、鼠、牛等哺乳動物的細胞中開展并取得了許多成果，但尚未見有關山羊細胞中S6K2的研究報道，也未見有山羊S6K2基因的cDNA核苷酸序列和與它對應的氨基酸序列的報道。

在各種情況下，有重要的原因研究和開發與山羊S6K2蛋白相關的基因克隆及其重組表達，因為研究清楚山羊的S6K2基因和蛋白的功能，可以用在提高細胞培養、胚胎移植和發育及出生后新生兒的存活的質量等方面，由重組S6K2蛋白制備的抗體可以檢測S6K2基因在不同種類的細胞、不同的細胞周期及個體的不同發育階段的表達情況。

發明內容

本發明人已經努力從山羊的不同組織細胞中分離S6K2基因。作為結果，本發明人從山羊肌肉組織細胞分離了S6K2基因的cDNA編碼區479bp片段，并且確定了它的核苷酸序列和由它的前477bp推斷出的氨基酸序列。本發明人通過比對已知的狗、猴、牛、人、大鼠、小鼠的S6K2基因的核苷酸序列，找到保守區，然后根據牛的S6K2基因(XM-582478)cDNA編碼區的序列，設計出了一對用于通過RT-PCR方法擴增山羊S6K2基因cDNA編碼區片段的簡并引物(上游引物稱為P1，下游引物稱為P2)，并應用這對引物擴增出了特異性片段，測序后得到了山羊S6K2基因的cDNA編碼區479bp片段，序列分析表明與牛的序列(XM-582478)同源性為98％(470/479)，推導出的由此序列編碼的氨基酸序列與牛的相比有3個氨基酸的差別。這一cDNA片段稱為“gS6K2”。

所以，本發明的目的是通過已知的不同物種的S6K2的核苷酸序列設計簡并引物，然后通過RT-PCR方法克隆山羊S6K2基因的cDNA編碼區片段。對該片段測序后提供編碼山羊S6K2蛋白的基因的cDNA的編碼區477bp的核苷酸序列和由此推斷的氨基酸序列(序列詳見序列表)。

附圖的簡要說明

從下面給出的說明結合附圖，本發明的上面目的的特征將變的明了。其中：

圖1顯示了牛S6K2基因的cDNA的核苷酸序列(GenBank登陸號XM-582478)。

圖2顯示了477bp的山羊S6K2基因的cDNA的編碼區核苷酸序列(SEQ?ID?NO：1)和由此推斷的氨基酸序列(SEQ?ID?NO：2)。

圖3是顯示從山羊肌肉組織分離的總RNA的RT-PCR的結果(479bp的cDNA?gS6K2)的電泳圖。