[發明專利]褐色喜熱裂孢菌木糖異構酶在釀酒酵母中的活性表達與應用

無效

• 申請號: 200810073563.8
• 申請日: 2008-05-05
• 公開（公告）號: CN101260394A
• 公開（公告）日: 2008-09-10
• 發明（設計）人: 王青艷;楊登峰;黃日波;孫靚;陸雁;肖代俊;黃志民;黎貞崇
• 申請（專利權）人: 廣西科學院
• 主分類號: C12N9/90
• 分類號: C12N9/90;C12N15/61;C12N15/81;C12P1/02
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1、一種褐色喜熱裂孢菌木糖異構酶的提取方法，其特征在于所述的木糖異構酶的基因選自褐色喜熱裂孢菌，提取方法包含以下步驟：

首先設計正向引物5’-ACTCATATGAAATCTAAAAGATTCCAAGTAT-3’，反向引物5’-ATAGGATCCTTACTCTTCTATTCTTAATTTATTT-3’，從基因組里經聚合酶鏈式反應獲得褐色喜熱裂孢菌基因，然后對前述反應產物進行初步純化，并利用EcoRI和HindIII對反應產物進行雙酶切，再與同樣經雙酶切的穿梭載體pYES2質粒連接，獲得表達質粒pYES2-xylA。

2、根據權利要求1所述方法提取的褐色喜熱裂孢菌木糖異構酶，其特征在于所述木糖異構酶的分子量為43KD，酶的最適反應溫度為80～85℃，酶的最適反應pH是7.0。

3、根據權利要求1所述方法提取的褐色喜熱裂孢菌木糖異構酶在釀酒酵母中的活性表達方法，其特征在于所述活性表達方法包含以下步驟：

制備釀酒酵母菌Sc的感受態細胞，然后用重組質粒pYES2-xylA電轉化Sc的感受態細胞，得重組釀酒酵母菌Sc/p?YES2-xylA，在可使木糖異構酶基因表達的條件下培養該重組菌，把細胞破碎后所得粗酶液用果糖做底物，在酶的合適條件下反應進行酶活力測定。

4、根據權利要求1所述方法提取的褐色喜熱裂孢菌木糖異構酶在釀酒酵母發酵產物中的應用。