[發明專利]一種測定葡萄糖的納米金催化共振散射光譜法

無效

• 申請號: 200810073470.5
• 申請日: 2008-02-04
• 公開（公告）號: CN101226151A
• 公開（公告）日: 2008-07-23
• 發明（設計）人: 廖獻就;溫桂清;蔣治良
• 申請（專利權）人: 廣西師范大學
• 主分類號: G01N21/75
• 分類號: G01N21/75;G01N21/64;G01N21/47
• 代理公司: 桂林市華杰專利事務所有限責任公司
• 代理人: 巢雄輝

技術領域：

本發明涉及葡萄糖的測定方法，具體地說是一種測定葡萄糖的納米金催化共振散射光譜法。

背景技術：

葡萄糖是生命活動中不可缺少的物質，它在人體內能直接參與新陳代謝過程，在消化道中，葡萄糖比任何其他單糖都容易被吸收，而且被吸收后能直接為人體組織利用，具有補充體液、供給能量、補充血糖、強心利尿、促進解毒功能，對癌癥也有一定治療作用。此外，葡萄糖還用在印染制革、制鏡工業和熱水瓶膽鍍銀工藝中。目前，葡萄糖的檢測方法主要有高效液相色譜法、酶催化法、斐林法等。前二種方法或儀器成本較高或使用較昂貴的酶試劑；雖然準確度較高，但要求在沸騰狀態下滴定，操作不便且選擇性不高。因此，建立一種簡便快速、選擇性較好、低成本的葡萄糖檢測方法是非常有意義的。

近年來，金屬納米粒子的催化性能研究及應用是一個十分活躍的研究領域。貴金屬金曾被認為是催化活性極低的元素，但近來發現小粒徑的納米金具有很好的催化性能。1939年James等人發現硝酸銀在膠體金表面被對苯二酚還原，膠體金起到了催化作用；Dansher建立了用銀顯影液增強光鏡下金顆粒可見性的金銀染色法；1983年Holgate等人進一步把這個發現運用到組織學的研究中去，創立了免疫金銀染色法。金催化金增強引起了人們濃厚的研究興趣，它極大地提高了檢測信號并避免了銀增強帶來的問題。此外，還可用作為標記物金納米粒子催化金增強檢測DNA和人免疫球蛋白G。近來，Mao等人將納米金催化銅增強用于檢測人免疫球蛋白G，結果同樣滿意。銅增強試劑易制備、易保存及穩定性好，有廣泛的應用前景。共振散射光譜法具有簡便、快速、靈敏等特點，已用于無機物、有機物、蛋白質、核酸等分析。迄今為止有關納米金催化共振散射光譜法檢測葡萄糖的方法尚未見報道。

發明內容：

本發明的目的是要為克服現有技術的不足，而公開一種操作簡便、快速、且靈敏度高、成本低的測定葡萄糖的納米金催化共振散射光譜法。

本發明測定葡萄糖的納米金催化共振散射光譜法包括以下步驟：

1、制備已知葡萄糖濃度的測試體系：

(1)在具塞比色管中，依次移取0.8-1.0mg.mL^-1硫酸銅溶液，10-12mg.mL^-1斐林試劑A(以氫氧化鈉計)，1.912-3.0μg.mL^-1金膠，一定量的濃度為1mg.mL^-1葡萄糖，0.60-0.72mg.mL^-1溴化鉀溶液，定容至一定體積，于75℃水浴槽內反應8-10min；

(2)反應完成后將試管放入冷水中冷卻至室溫終止反應；

(3)用熒光分光光度計，設置電壓450V，激發狹縫＝發射狹縫＝2.5nm，同步掃描激發和發射波長(λ_em-λ_ex＝0nm)得到體系的RSS光譜。在610nm處測定體系的散射光強度；

2、依據步驟一的方法制備試劑空白體系：求得試劑空白體系的(I_610nm)_b；

3、計算ΔI_610nm＝I_610nm-(I_610nm)_b值；

4、以加入的葡萄糖濃度C為橫坐標，ΔI為縱坐標，繪制工作曲線；

5、依照步驟一的方法制備檢測體系：其中加入的是未知葡萄糖濃度的被測物，求被測物的ΔI；

6.根據工作曲線，即可求得被測樣品中葡萄糖在一定線性范圍內的濃度，其工作曲線為ΔI_610nm＝7.830C-60.60，相關系數為0.9959，檢出極限為8μg.mL^-1。

步驟1所述的具塞試管為5mL的具塞試管，依次加入的硫酸銅溶液最佳濃度為0.828mg.mL^-1，斐林試劑A(以氫氧化鈉計)最佳濃度為11mg.mL^-1，金膠最佳濃度為1.91μg.mL^-1，1mg.mL^-1葡萄糖用量為50μL～120μL，溴化鉀溶液最佳濃度為0.72mg.mL^-1，定容體積為2.5mL，水浴溫度為75℃，最佳水浴反應時間為9min；

所述的冷卻方式為流水冷卻；

所述的共振散射測定波長為610nm；

所述的測定葡萄糖的線性范圍為20～48μg.mL^-1。