[發(fā)明專利]利用高速逆流色譜法純化異槲皮素和山萘酚－3－0－葡萄糖苷的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810072949.7
• 申請(qǐng)日: 2008-09-04
• 公開（公告）號(hào): CN101343300A
• 公開（公告）日: 2009-01-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 阿吉艾克拜爾·艾薩;阿不力米提·伊力;吳韜
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國科學(xué)院新疆理化技術(shù)研究所
• 主分類號(hào): C07H17/07
• 分類號(hào): C07H17/07;C07H1/06;B01D15/42
• 代理公司: 烏魯木齊中科新興專利事務(wù)所
• 代理人: 張莉

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及利用高速逆流色譜法純化異槲皮素和山萘酚-3-O-葡萄糖苷的方法，主要用于從復(fù)雜的天然藥物提取物中分離和制備高純度植物異槲皮素和山萘酚-3-O-葡萄糖苷化學(xué)對(duì)照品的制備。

背景技術(shù)

近20年來發(fā)展起來的高速逆流色譜技術(shù)(High-speedcounter-current?chromatography，HSCCC)是一種沒有固態(tài)支撐體的液—液分配色譜技術(shù)，以輕巧的聚四氟乙烯螺旋管作為分離柱，固定相和流動(dòng)相都是液態(tài)，螺旋管自轉(zhuǎn)的同時(shí)，繞一平行于自轉(zhuǎn)軸的外部軸線做公轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng)，借以獲得足夠強(qiáng)的離心力場，在兩相中的一相得以保留的前提下，形成固定相與流動(dòng)相的兩相分割趨勢和對(duì)流趨勢，這種分割和對(duì)流的過程是連續(xù)進(jìn)行的，如果把要分離的樣品從螺旋管柱的入口注入，連續(xù)的分配傳遞過程就會(huì)在管柱里進(jìn)行，從而實(shí)現(xiàn)連續(xù)的、高效的液—液分配過程。HSCCC分離效率高；操作簡單，樣品不需嚴(yán)格的預(yù)處理；可從極復(fù)雜的粗制樣品中一步分離得到高純度的組分；分析/分離粘度較高和易被固定相吸附的樣品方面具有明顯優(yōu)勢；可以分析/分離黃酮、生物堿、醌類、類脂等小分子化合物，也可分析/分離多肽、多糖、蛋白質(zhì)等高分子化合物，適用范圍比較廣泛；能夠明確表達(dá)中藥材這種復(fù)雜體系中不同批次間的差異，穩(wěn)定性和重現(xiàn)性好；其儀器及耗材完全國產(chǎn)化，成本明顯低于高效液相色譜。隨著天然藥物的蓬勃發(fā)展HSCCC的主要研究領(lǐng)域集中于天然藥物的分離純化，已從幾十種天然原料中分離得到數(shù)百種高純度的單體化合物。非常適合于維藥化學(xué)對(duì)照品的制備。

維吾爾藥有著獨(dú)特的治病理念，是中國民族藥的重要組成部分，但其應(yīng)用基本局限在新疆自治區(qū)的范圍內(nèi)，在全國范圍及世界各地的推廣速度緩慢。導(dǎo)致這種情況的主要原因：一是生產(chǎn)工藝離現(xiàn)代醫(yī)藥工業(yè)優(yōu)質(zhì)化生產(chǎn)要求還有很大差距；二是原藥材的主要活性成分是次生代謝物，對(duì)后天的生長環(huán)境依賴性很強(qiáng)，原料藥來自天然，又多為人工分散采收、加工，受天氣、地域差別及人為因素影響很大，原料、中間體及最終產(chǎn)品離規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化管理還有很大差距，缺乏嚴(yán)格的質(zhì)量監(jiān)控標(biāo)準(zhǔn)和良好的監(jiān)控方法，很難保證產(chǎn)品質(zhì)量的穩(wěn)定性；三是維藥產(chǎn)品的療效缺乏采用現(xiàn)代藥物臨床研究常用的“隨機(jī)分組”、“對(duì)照”、“雙盲”、“多點(diǎn)觀察”等科學(xué)實(shí)驗(yàn)方法獲得的科學(xué)數(shù)據(jù)說明，難為現(xiàn)代醫(yī)學(xué)工作者和管理機(jī)構(gòu)所信服。維藥現(xiàn)代化是維藥產(chǎn)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的根本出路。維藥原料和成藥(片劑、顆粒劑、口服液、注射劑)的質(zhì)量監(jiān)控是維藥現(xiàn)代化進(jìn)程中迫切需要解決的關(guān)鍵問題之一。而標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品是質(zhì)量監(jiān)控的重要物質(zhì)基礎(chǔ)，可供原藥材種植基地監(jiān)控氣候、地域、采收期及人為因素等對(duì)藥材質(zhì)量的影響，指導(dǎo)種植；可供成藥生產(chǎn)廠家指導(dǎo)藥材的合理勾兌，控制中間體及最終產(chǎn)品的質(zhì)量，建立相關(guān)企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)；為指紋圖譜中重要指標(biāo)成分的標(biāo)定及譜效關(guān)系建立提供基礎(chǔ)。

而無論是維吾爾藥還是中藥的研究與開發(fā)，都嚴(yán)重缺乏高純度的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品，這是制約標(biāo)準(zhǔn)制訂與實(shí)施的關(guān)鍵因素之一。目前國家質(zhì)量技術(shù)監(jiān)督局正在建立各種國家實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)，天然藥物的標(biāo)準(zhǔn)品是其中的重要內(nèi)容。

沙生蠟菊(Helichrysum?arenium(L.)Moech.)是菊科(Compositae)蠟菊屬植物，廣泛分布于中國新疆，中亞，歐洲等地，為維吾爾醫(yī)常用藥材，在民間有悠久的歷史。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道沙生蠟菊有利尿、保肝、抗病毒、抗氧化等活性，主要用于治療膽囊炎、膽結(jié)石。為了更深入的了解沙生蠟菊物質(zhì)作用基礎(chǔ)，我們對(duì)該植物全草提取物的化學(xué)成分進(jìn)行了深入的研究。

我們針對(duì)化學(xué)對(duì)照品嚴(yán)重缺乏的問題，在已有的維吾爾藥藥效學(xué)研究基礎(chǔ)上，采用近年來發(fā)展迅速的高速逆流色譜技術(shù)，同時(shí)制備異槲皮素和山萘酚-3-O-葡萄糖苷等兩種代表性化學(xué)成分的方法，并采用該方法獲得了高純度(純度95％上)的異槲皮素和山萘酚-3-O-葡萄糖苷的單體化合物；建立以高速逆流色譜為核心技術(shù)的標(biāo)準(zhǔn)對(duì)照品制備平臺(tái)，為維藥化合物庫的建立及國家實(shí)物標(biāo)準(zhǔn)的申請(qǐng)打下基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的在于，提供一種利用高速逆流色譜法純化異槲皮素和山萘酚-3-O-葡萄糖苷的方法，該方法是將分離溶劑系統(tǒng)置于分液漏斗中充分振搖后靜置分層，取上相作為固定相，下相作為流動(dòng)相，取沙生蠟菊提取物溶解于上相和下相的混合溶液中，再將固定相用泵灌滿色譜分離柱，然后將柱的首端與進(jìn)樣閥相接，待流動(dòng)相開始流出色譜柱時(shí)，收集分離物，將不同成分分別收集、濃縮、干燥，分離得到95％以上的異槲皮素和山萘酚-3-O-葡萄糖苷的單體化合物。

本發(fā)明所述的一種利用高速逆流色譜法純化沙生辣菊異槲皮素和山萘酚-3-O-葡萄糖苷的方法，按下列步驟進(jìn)行：