[發明專利]樹脂吸附法制備表沒食子兒茶素沒食子酸酯的方法

無效

• 申請號: 200810072019.1
• 申請日: 2008-10-24
• 公開（公告）號: CN101386614A
• 公開（公告）日: 2009-03-18
• 發明（設計）人: 王瑞芳;陳發河;田標;翁凌;吳光斌;張凌晶
• 申請（專利權）人: 集美大學
• 主分類號: C07D311/62
• 分類號: C07D311/62;B01D15/08
• 代理公司: 廈門市新華專利商標代理有限公司
• 代理人: 渠述華

技術領域

本發明涉及一種天然產物的生產方法，特別是涉及一種采用樹脂吸附法制備表沒食子兒茶素沒食子酸酯的方法，它屬于天然有機化學和農產品的深度加工領域。

背景技術

兒茶素作為茶葉中重要的一類天然活性物質，近年來隨著對其組分化學結構、理化性質及生物活性研究的深入，需要提供大量高純度兒茶素作為制藥原料、標準品或生物合成品的前體物質，新的領域對產品總兒茶素含量，特別是表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)的含量提出了更高的要求，傳統提制技術和產品已經不能滿足發展的需要。研究各種兒茶素的藥理活性和協同作用以及在體內的代謝，開發兒茶素類新藥，也均需大量高純度的多種兒茶素單體，尤其是EGCG單體，現已被列為一種潛在的抗癌藥物在中美等國被研究。

近年來，國內外有許多關于提純制備EGCG的研究，利用了許多新型分離、制備方法，但主要還是以色譜分離為主。原理是利用兒茶素各單體之間的性質差異，選擇不同的吸脫附劑，使之得到分離，具體而言，主要有以下幾種方法：

1)柱色譜：以綠茶萃取物為原料，直接上填料柱，選用合適的洗脫劑進行等度或梯度洗脫，并定性收集無交叉的流份，從而得到EGCG純品。

2)柱色譜預分離-制備型HPLC提純：以綠茶提取物為原料，經柱色譜除去雜質，并將兒茶素中幾種單體預分離為幾個組分后，再用制備型HPLC分離其中含EGCG的組分，可得到EGCG純品。

3)有機溶劑富集-柱色譜純化：以綠茶提取物或茶多酚為原料，經有機溶劑多次萃取，除去雜質，提高兒茶素總純度后，再用SephadexLH-20柱色譜法分離可得EGCG單體。

4)高效液相色譜法：以兒茶素粗品為原料，選擇、優化出合適的柱操作條件，直接用HPLC分離出兒茶素單體。

5)沉淀-吸附法：利用兒茶素能與某些金屬形成金屬鹽沉淀，再用酸將其沉淀溶解，最后用柱色譜法除雜質，可得到EGCG單體。

溶劑萃取法中大量使用有毒有機溶劑(氯仿)，溶劑殘留難為食品和醫藥等行業所接受；沉淀法需調節酸堿度，使部分多酚類物質因氧化而破壞，影響產品質量；HPLC法處理量小，成本高；此外，現代新型分離技術，如制備型高效逆流色譜法和超臨界流體萃取技術，雖也已應用于EGCG的提取研究，但尚處于起始階段。柱色譜法既可克服溶劑萃取法中大量使用有毒有機溶劑的缺點又可避免沉淀法中大量使用重金屬沉淀劑的缺點，處理量大，適于EGCG的工業化分離制備，但產品純度偏低。

發明內容

本發明的目的在于提供一種工藝簡單、不使用有毒有機溶劑，產物純度高、符合食品安全要求的樹脂吸附法制備表沒食子兒茶素沒食子酸酯的方法。其工藝設計原理是利用吸附分離高分子材料對各兒茶素單體及色素吸附選擇性的不同，進行柱色譜分離，并結合膜分離技術、凝膠色譜分離技術制備高純度EGCG單體。

為實現上述目的，本實用新型的技術解決方案是：

本發明是一種樹脂吸附法制備表沒食子兒茶素沒食子酸酯的方法，包括如下步驟：1)配液：用30～40％乙醇水溶液溶解茶多酚提取物，得深茶紅色茶多酚溶液，茶多酚濃度為1.5～2.5g/L；2)吸附層析：常溫常壓下，茶多酚溶液經超高交聯吸附樹脂吸附層析脫其它兒茶素得到表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)收集液；3)吸附脫色：常溫常壓下，1000～1200毫升的EGCG收集液經60～80毫升的極性大孔吸附樹脂脫色，除去色素雜質，溶液由深茶紅色變為淡黃色；4)納濾濃縮：EGCG脫色后，收集液納濾濃縮；5)EGCG單體制備：將EGCG的納濾濃縮液經葡聚糖凝膠Sephadex?LH-20層析純化，收集EGCG單體流份，冷凍干燥得固體產品。

步驟1)中用1000毫升的30～40％乙醇水溶液溶解茶多酚提取物1.5～2.5克。

步驟2)中用1000毫升的茶多酚溶液經60～80毫升的超高交聯吸附樹脂吸附層析脫其它兒茶素得到表沒食子兒茶素沒食子酸酯(EGCG)收集液。

步驟2)吸附脫除其它兒茶素組分是采用對其它兒茶素組分吸附選擇性較高的超高交聯吸附樹脂作為柱填料，茶提取物中其它兒茶素被樹脂吸附，EGCG隨上柱液流出，流速1BV/h；選用的樹脂為高比表面積超高交聯苯乙烯-二乙烯苯聚合物，平均孔徑85～95nm，比表面積1000～1100m²/g，平均粒徑0.177～0.42mm。