[發明專利]以睪丸激素受體3為靶點的化合物篩選方法

無效

• 申請號: 200810071956.5
• 申請日: 2008-10-17
• 公開（公告）號: CN101372708A
• 公開（公告）日: 2009-02-25
• 發明（設計）人: 吳喬;劉晶晶;鄭忠輝;沈月毛
• 申請（專利權）人: 廈門大學
• 主分類號: C12Q1/02
• 分類號: C12Q1/02;C12Q1/66;G01N21/76
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所
• 代理人: 馬應森

技術領域

本發明涉及一種以睪丸激素受體3(Testicular?orphan?nuclear?receptor-3，TR3)為靶點的化合物(包括激動劑和拮抗劑)篩選方法，其中涉及到一種應用于該篩選方法的檢測TR3轉錄激活水平的報告質粒(pNurRE-Luc)，此外，還涉及利用所述方法篩選獲得的抗腫瘤和調節血糖化合物。

背景技術

細胞核受體組成了一個受體超家族(nuclear?receptor?superfamily)，包括類固醇激素受體(steroid?receptor)、甲狀腺激素受體(thyroid?hormone?receptor，TR)、維生素D3受體(vitamin?Dreceptor，VDR)、視黃酸受體(retinoic?acid?receptor，RAR)以及近幾年發現的數目眾多的孤兒受體(orphan?receptor)。這些受體的共同特征是都具有在序列上高度保守的、由兩個鋅指結構組成的DNA結合區及一個配體結合區。它們能夠與特定DNA上的應答元件結合，調控特定基因的轉錄和表達，從而在細胞的生長、分化和凋亡等生物學過程中發揮重要的調節作用(Mangelsdorf?D?J，Thummel?C，Beato?M，et?al.The?nuclear?receptor?superfamily:the?seconddecade[J].Cell，1995，83(6):835-839)。

孤兒受體是指一類目前尚未發現其相應配體的核受體。現已發現的孤兒受體已達百種以上，它們能夠相互作用或者與其它轉錄因子相互作用，以調控不同基因的轉錄和表達。TR3(Testicular?orphan?nuclear?receptor-3)也稱Nur77、NGFI-B和NAK1，也是一種孤兒受體，它是由立早基因(immediate?early?gene)NR4A1編碼的蛋白，屬于類固醇/甲狀腺受體超家族。TR3家族包括三個成員，分別為TR3、Nurr1和Nor-1，它們可以被血清及各種生長因子如表皮生長因子(EGF)、神經生長因子(NGF)、成纖維細胞生長因子(FGF)、血小板生長因子(PDGF)或者佛波酯等誘導表達，具有復雜的生物學功能，參與了細胞的增殖、分化、發育和凋亡過程。

1985年，Lau等人(Hazel?T.G，Nathans?D.&?Lau?L.F..A?gene?inducible?by?serum?growthfactors?encodes?a?member?of?the?steroid?and?thyroid?hormone?receptor?superfamily.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，1988，85:8444-8448)發現處于靜息狀態的小鼠細胞經血清和生長因子處理后，在幾分鐘內有一批基因被誘導表達。他們在由這些立早基因構成的cDNA文庫中克隆鑒定出nur77基因。1989年，Chang等(Chang?C.，Kokontis?J.，Liao?S.S.&?Chang?Y.Isolation?andcharacterization?of?human?TR3?receptor:a?member?of?steroid?receptor?superfamily.J.SteroidBiochem.，1989，34:391-395)用針對類固醇激素受體超家族成員共有DNA結合序列為探針，在人前列腺細胞的cDNA文庫中分離到一個新的基因并命名為TR3。同年，Matson等(Watson?M.A.&?Milbrandt?J.The?NGFI-B?gene，a?transcriptionally?inducible?member?of?the?steroid?receptorgene?superfamily:genomic?structure?and?expression?in?rat?brain?after?seizure?induction.Mol.CellBiol.，1989，9:4213-4219)在大鼠中發現了nur77的另一個同源物NGFI-B。