[發明專利]用于高純藥源單體的河豚毒素的制備方法

有效

• 申請號: 200810071920.7
• 申請日: 2008-10-10
• 公開（公告）號: CN101367821A
• 公開（公告）日: 2009-02-18
• 發明（設計）人: 易瑞灶;謝全靈;洪碧紅;張怡評;許晨;陳偉珠;洪專;林靜;樂清清;陳暉;楊志文
• 申請（專利權）人: 廈門朝陽生物工程有限公司;國家海洋局第三海洋研究所
• 主分類號: C07D491/18
• 分類號: C07D491/18
• 代理公司: 廈門南強之路專利事務所
• 代理人: 馬應森

技術領域

本發明涉及一種天然高活性雜環化合物，尤其是涉及一種用于高純藥源單體的河豚毒素 的制備方法。

背景技術

河豚毒素(Tetrodotoxin，TTX)是一種主要由河豚魚內臟提取的分子結構明確的非蛋白毒 素，其結構為一種獨特的籠狀原酸酯立體結構。由于河豚毒素在河豚魚內臟的單位含量極低， 給提取純化帶來了很大的困難。自1909年首次報道河豚毒素以來，經過了40～50年才獨立 地分離出河豚毒素。至層析技術出現后，河豚毒素的分離才變得較為容易。日本三共公司曾 經壟斷國際市場河豚毒素的供給，20世紀80年代后期，隨著日本河豚魚資源的枯竭和中國 在河豚毒素提取技術的進步，河豚毒素的粗品已經部分由中國供給，也由于資源大部分在中 國，國外對河豚毒素的規模化制備技術近年來并未進行深入研究。

縱觀文獻所述，分離提取與純化TTX的方法，主要有活性炭柱層析法、離子交換-活性 炭柱層析法、苦味酸鹽精制法和高效液相色譜純化法等。由于TTX只溶于酸性水溶液中，其 他任何溶劑基本上均不溶，因此，采用苦味酸鹽重結晶以及用溶媒轉移的方法無法得到純度 大于99％的高純TTX晶體。目前，文獻報道的制備高純TTX的工藝幾乎均為高效液相-紫外 檢測的純化精制工藝，其中制備柱選用ODS柱，流動相主要選擇庚烷磺酸鈉溶液、十二烷基 磺酸鈉溶液或磷酸鹽緩沖液，也有使用醋酸水溶液的報道，收集方式是參照TTX標準品的紫 外圖譜，收集對應TTX的流出液，經結晶干燥獲得TTX純品。該工藝一方面收率較低，無 法有效杜絕背景雜質的引入，難以形成全自動精確控制的可規模化生產高純TTX原料藥的堅 實保障供給體系；另一方面，在規模化精制TTX的生產上缺乏需要較高安全性的保障體系。 因此，仍需研發用于規模化安全生產TTX藥源的高獲得率、高分離度的純化工藝技術。

公告號為CN1385431的發明專利提供一種主要以河豚魚卵巢或/和肝臟為原料進行規模 化提取制備河豚毒素高純單體的方法，采用微濾，超濾，納濾和反滲透等多種前沿膜分離技 術高效組合協同作用，進行河豚毒素的規模化提取制備并得到河豚毒素結晶。具有高效可靠 的優點，可批量獲得純度優于99％的河豚毒素提取物。制得的河豚毒素是神經中樞鈉通道阻 滯劑，潛在著獨特的藥用功能和不凡的藥理作用，是具有顯著經濟效益的高值海洋藥物資源。

發明內容

本發明的目的是提供一種操作簡便、收率高、適于自動化控制規模化生產的用于高純藥 源單體的河豚毒素的制備方法，所制備的河豚毒素的純度高于99％，可用于人用藥物的高純 藥源單體，該制備方法是一種制備過程自動化控制程度高、高通量、高分離度的制備純化工 藝。

本發明包括以下步驟：

1)以河豚毒素粗品為原料，醋酸水溶液為溶媒，配制成待純化液；

2)將待純化液轉入制備型高效液相-質譜儀器系統的儲料管中，選擇流動相，啟動制備 型高效液相-質譜儀器系統，純化河豚毒素，得河豚毒素純化液。流動相選擇醋酸體系、三 氟乙酸體系或醋酸-醋酸銨體系。醋酸體系選自醋酸水溶液、醋酸-甲醇水溶液、醋酸-乙睛水 溶液中的一種；三氟乙酸體系選自三氟乙酸水溶液、三氟乙酸-甲醇水溶液、三氟乙酸-乙腈 水溶液中的一種；醋酸-醋酸銨體系選自醋酸-醋酸銨水溶液、醋酸-醋酸銨-甲醇水溶液、醋酸 -醋酸銨-乙腈水溶液中的一種；

3)選擇質譜觸發自動收集河豚毒素純化液，然后采用真空濃縮，低溫結晶，干燥，得用 于高純藥源單體的河豚毒素。

在步驟1)中，河豚毒素粗品的純度最好大于40％，按質量百分比，醋酸水溶液的濃度 為0.01％～6.0％，待純化液的濃度可為含TTX粗品5～100mg/ml，優選10～50mg/ml。