[發明專利]一種靈芝雜交育種方法

無效

• 申請號: 200810071773.3
• 申請日: 2008-09-16
• 公開（公告）號: CN101352144A
• 公開（公告）日: 2009-01-28
• 發明（設計）人: 謝寶貴;林俊華;鄧優錦
• 申請（專利權）人: 福建農林大學
• 主分類號: A01H1/02
• 分類號: A01H1/02;A01H4/00;C12N1/14;C12R1/645
• 代理公司: 暫無信息
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技術領域?本發明涉及一種食用菌育種方法，特別是一種靈芝雜交育種方法。?

背景技術?食用菌的育種方法一般包括野生種馴化、誘變育種、原生質體融合育種、基因工程育種和雜交育種等。?

野生種馴化是從野生靈芝子實體中分離獲得菌絲體，經過栽培試驗，篩選獲得優良菌種，這種育種方法需要分離獲得大量的菌株，從中選出高產優質的品種，只能從現有的菌株中篩選，不能創造出新的種性。?

誘變育種是通過物理或化學的手段，促進變異，再從眾多的變異體中篩選出好的品種，這是一種隨機性很強育種方法，需要大量的篩選才有可能獲得好品種。?

原生質體融合育種是一種用于遠緣雜交克服“種間性隔離”的技術，上世紀八十年代在食用菌廣泛研究，但由于在有絲分裂過程中有些染色體會丟失，融合子不穩定，這種育種技術未得到廣泛應用。?

基因工程育種是近年來發展起來的新技術，具有目標明確的特點，但這一技術在食用菌育種中還處在研究試驗階段，尚未廣泛應用。?

雜交育種，國外有用酵母菌與靈芝孢子共培養，培養時間4—6周，可誘導少量靈芝孢子萌發，萌發率低于1/10⁸。國外的這種方法存在以下缺點：①試驗時間長；②萌發率很低，需要大量的試驗才能獲得可用于雜交的單孢菌株；③需要除去酵母菌后才能用于雜交。由于酵母菌的生長速度遠遠快于靈芝菌絲，如果沒有除去酵母菌，經常會由于酵母菌大量生長而使靈芝菌絲不生長。?

雜交育種是一種有效的品種改良技術，雜交育種可以組合雙親的優良性狀、表現出雜種優勢，培育出超越親本的雜交種。雜交育種在食用菌中已廣泛應用，取得很大成效。?

現代醫學研究證明，靈芝對治療神經衰弱、慢性支氣管炎、冠心病、心絞痛及高血脂、高血壓、肝炎、造血系統疾病等有良好的療效。由于含?有靈芝多糖，靈芝可以提高機體免疫功能，增強體質，具有抗腫瘤的作用。?

我國靈芝年產量約2000噸，創產值約20億元人民幣，在50多種食用菌中單種產值最大。但由于我國靈芝人工育種研究相對落后，我國主栽的品種都是從國外引進或者是從引進品種分離獲得。這種狀況在一定程度上制約靈芝產業的發展。?

鑒于靈芝具有很高的藥用價值，靈芝產業又是一個很大的產業，如果能建立一種高效的雜交育種技術，將會促進靈芝新品種的培育，進而促進靈芝產業的進一步發展。?

發明內容?本發明目的是探索解決靈芝雜交育種中單孢菌株難以獲得的問題，為靈芝的雜交育種提供一種新方法。?

本發明的一種靈芝雜交育種方法，包括靈芝親本菌株選擇、菌絲培養、再生培養基配制、菌絲裂解、單細胞再生、單核細胞分離、單核體雜交，雜交菌株培養并篩選，其特征在于?

1、所述菌絲裂解?

將經過2次活化、處于生長對數期中期的親本液體菌絲分別放入離心管中，離心后取沉淀，并加入無菌水清除菌絲外壁的雜質，再用穩滲液清洗，將清洗后的菌絲懸浮于溶壁酶液，于30℃的循環水浴鍋中恒溫水浴至單細胞完全釋放，得單細胞裂解液；所述穩滲液為0.6M甘露醇水溶液；所述溶壁酶液為含2％溶壁酶的穩滲液。?

2、所述單細胞再生，?

離心單細胞裂解液，取沉淀，并用再生培養基清洗沉淀至單細胞外不含溶壁酶，然后用再生培養基稀釋至單細胞濃度為2～3個/低倍鏡視野，將單細胞稀釋液涂布至再生培養基平板中，并倒置培養皿于25℃培養箱中培養，至單細胞開始萌發；?

3、所述單核細胞分離?

從單細胞萌發的培養皿中挑取單個已長出芽管的單細胞連同培養基放入斜面培養基中，于25℃培養，長出3～5cm的菌落時，鏡檢挑取無鎖狀聯合的菌株，即為單核菌株。?

本發明的靈芝雜交育種方法，解決了由于靈芝孢子的細胞壁很厚，在人工條件下幾乎不萌發，難以進行雜交育種的難題。?

本發明的靈芝雜交育種方法，通過菌絲裂解形成單細胞，并萌發成單核菌株進行雜交育種，整個過程不超過20天即可完成，單核細胞的獲得率不低于35％，雜交育種的速度快、成功率高。?

利用本發明的方法進行靈芝雜交育種，其后代的遺傳性狀穩定，而無論是誘變育種還是原生質體融合育種所得到的后代，通常遺傳性狀不穩定。?

由于常規的雜交育種需要擔孢子作為原材料，而擔孢子是從靈芝子實體中彈射而來，因此常規的雜交育種受季節限制，一年只能做一批；本發明的雜交育種方法，所用的原材料是靈芝的菌絲，通過液體發酵，幾天時間就可以得到，不受季節限制，一個月就可以做幾批次。?

具體實施例：為了充分公開本發明的靈芝雜交育種方法，以下結合實施例加以說明。?