[發明專利]鼠神經生長因子的制備方法和注射用鼠神經生長因子的制備方法

有效

• 申請號: 200810071315.X
• 申請日: 2008-06-27
• 公開（公告）號: CN101613394A
• 公開（公告）日: 2009-12-30
• 發明（設計）人: 熊玲媛;任宏偉;孫朗;陳遠志;馬凌燕;楊佑瑤
• 申請（專利權）人: 熊玲媛;任宏偉;廈門北大之路生物工程有限公司
• 主分類號: C07K1/34
• 分類號: C07K1/34;C07K1/18;C07K14/48;A61K9/19;A61K38/18
• 代理公司: 廈門市首創君合專利事務所有限公司
• 代理人: 張松亭

1.一種鼠神經生長因子的制備方法，將小鼠頜下腺組織勻漿，反復凍融破碎細胞，離心 去沉淀，得勻漿上清液；勻漿上清液去除細胞碎片后上陽離子交換層析I，收集流穿 液，流穿液進行酸化解離、離心，得酸解上清液；將酸解上清液上陽離子交換層析II， 經Tris-HCl流洗后用Tris-HCl-NaCl溶液洗脫；收集目標蛋白峰，得蛋白收集液，蛋 白收集液進行100KD超濾膜過濾后，將100KD超濾膜濾下液用注射用水或注射用生理 鹽水稀釋至1～40μg/ml，在55～65℃水浴中恒溫1～12小時，然后經5KD超濾膜和 除菌過濾制得神經生長因子原液，其中，所述的陽離子交換層析柱I的介質為 CM-Cellulose?52或CM-Sepharose?FF，陽離子交換層析柱II的介質為CM-Cellulose 52或CM-Sepharose?FF。

2.根據權利要求1中所述的鼠神經生長因子的制備方法，其特征在于：100KD超濾膜濾 下液用注射用水或注射用生理鹽水稀釋至5～30μg/ml。

3.根據權利要求2中所述的鼠神經生長因子的制備方法，其特征在于：100KD超濾膜濾 下液用注射用生理鹽水稀釋至20μg/ml。

4.根據權利要求3中所述的鼠神經生長因子的制備方法，其特征在于：所述20μg/ml 100KD超濾膜濾下液在60℃±1℃水浴中恒溫10小時。

5.根據權利要求1中所述的鼠神經生長因子的制備方法，其特征在于：陽離子交換層析 I流穿液用pH4.0的醋酸緩沖液進行酸化解離10分鐘。

6.一種注射用鼠神經生長因子的制備方法，在注射用生理鹽水中加入權利要求1～5中任 一項制得的鼠神經生長因子原液中加入賦形劑和穩定劑，除菌過濾后分裝、凍干得制 品。

7.根據權利要求6中所述的注射用鼠神經生長因子的制備方法，其特征在于：賦形劑為 甘露醇，穩定劑為人血白蛋白。