[發(fā)明專利]一種細胞綜合檢測方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810070940.2
• 申請日: 2008-04-18
• 公開（公告）號: CN101560544A
• 公開（公告）日: 2009-10-21
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 趙宇;布蘭科·帕爾切克
• 申請（專利權(quán)）人: 麥克奧迪實業(yè)集團有限公司
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06;C12Q1/68
• 代理公司: 廈門市新華專利商標代理有限公司
• 代理人: 李 寧

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及細胞形態(tài)學分析和DNA定量分析方法，具體是一種結(jié) 合了定性和定量分析的細胞綜合檢測方法。

技術(shù)背景

近一個世紀以來，隨著醫(yī)學的發(fā)展，病理研究的深入，對細胞的 定性和定量檢測已成為醫(yī)學上的常用方法。

細胞形態(tài)學分析就是對細胞進行定性檢測的方法，通過在顯微鏡 下觀察脫落細胞的形態(tài)學特征來對細胞進行定性分析，以供是否作進 一步的病理分析作參考。為了對細胞進行觀察，通常要先對整個細胞 進行染色，令細胞膜、細胞質(zhì)和細胞核可以容易的在顯微鏡下觀察， 常用的染色方法有：蘇木精伊紅染色法(同組織切片染色)、巴氏染 色法、紹氏染色法、邁格吉染色等。在細胞形態(tài)學分析中僅有幾種描 述性的細胞特征(如很大的細胞核、很大的核漿比例或者顆?；瘒乐? 的細胞核等)，但是，這些觀察都是主觀的，不具有很好的重復性， 而且細胞學家必須經(jīng)過很好的訓練才能正確地檢測和診斷疾病。此 外，由于此種觀測方法主觀因素太強，醫(yī)生自身及醫(yī)生之間存在著很 大的差異，容易導致分析不夠準確。雖然細胞形態(tài)學分析的診斷準確 率只有60％左右，但在近一個世紀以來仍然在醫(yī)學中得到了廣泛的應(yīng) 用。

許多國家?guī)资甑姆腊┢詹榻Y(jié)果證實，用巴氏涂片作為子宮頸癌 的篩查方法可以及早對子宮頸癌發(fā)現(xiàn)和治療，使子宮頸癌死亡率明顯 下降。然而，由于受取材方法、涂片制作、染色技巧、閱片水平等因 素影響，導致巴氏細胞學方法假陰性率達15％～40％。巴氏方法的另 一不足是與其它常規(guī)細胞病理學診斷方法一樣，對子宮頸癌前病變的 發(fā)展趨向無法進行預(yù)測評估。

自從1924年Feulgen(福爾根)等人建立了DNA-Feulgen染色方 法以來，至今這種方法仍是DNA定量測定的主要染色方法之一。 Feulgen染色是經(jīng)典顯示去氧核糖核酸的方法，其具體反應(yīng)原理是， 標本經(jīng)稀鹽酸水解后，DNA分子中的嘌呤堿基被解離，從而在核糖的 一端出現(xiàn)了醛基，醛基具有還原作用，可與無色品紅結(jié)合形成紫紅色 化合物，從而顯示出DNA的分布。近30年來，隨著數(shù)碼顯微鏡的發(fā) 展，現(xiàn)在已經(jīng)可以捕捉細胞圖像到計算機內(nèi)存，并對細胞進行非常精 確的測量。特別有用的是利用DNA特異和化學計量的染色方法(即染 色與細胞核DNA和含量成正比)對細胞核的DNA進行染色，可以測量 細胞核的特征。例如福爾根染色在定量細胞學中得到了廣泛的應(yīng)用。 利用這種方法就可以計算細胞核的DNA含量，從而計算出處于不同細 胞周期的細胞數(shù)目比例，對不同的細胞類型進行檢測和分類，以及對 非整倍體細胞進行檢測等等。DNA含量的變化可作為直接反映腫瘤增 殖能力的重要生物學指標。細胞增殖取決于細胞核的DNA復制與細胞 分裂。細胞癌變的本質(zhì)是細胞迅速無限增殖和轉(zhuǎn)移，測定細胞核DNA 含量，可作為惡性腫瘤的客觀指標。然而這種方法受制于DNA固定的 好壞、染色的深淺及測定系統(tǒng)(掃描顯微鏡、數(shù)碼相機、應(yīng)用軟件等) 的品質(zhì)，并且這種方法沒有利用細胞形態(tài)學方面的信息，而這方面的 信息對很多病例的診斷和預(yù)測有很大的作用。

因此，一般來說，這兩種分析方法(定性和定量)有以下問題： 1、細胞形態(tài)學定性分析的方法只基于細胞的形態(tài)學特征，依賴細胞 學家的經(jīng)驗和技巧，誤診率非常高。2、DNA定量分析方法基于DNA 特異的染色方法，依賴于細胞核的特征，不能提供任何關(guān)于細胞形態(tài) 學方面的信息。

到目前為止，還沒有一種方法可以同時進行細胞的形態(tài)學特征定 性分析和DNA定量分析，然而，在許多疾病診斷過程中，為了提高準 確率，需要同時進行定性和定量兩方面檢測，因此需要分別進行兩次 切片和染色，不僅十分麻煩，還增加病患的費用負擔，而且，定性和 定量檢測的結(jié)果不能一一對應(yīng)，比如說醫(yī)生在觀測細胞形態(tài)學特征是 發(fā)現(xiàn)某個具有特異性的細胞，想得到該細胞的DNA定量分析數(shù)據(jù)以便 進行對照確認時，卻無法實現(xiàn)，因為無法在進行DNA定量分析的切片 中找到對應(yīng)的細胞以進行分析。

因此，亟需一種能同時進行細胞形態(tài)學分析與DNA定量檢測的細 胞檢測方法，本案油然而生。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種能同時進行細胞形態(tài)學分析和細胞核 DNA定量檢測的細胞綜合檢測方法，利用本方法可檢測出一個細胞的 大量信息，提高細胞檢測及分類的準確性。

為了達成上述目的，本發(fā)明的解決方案是：

一種細胞綜合檢測方法，包括以下步驟：