[發(fā)明專利]一種細(xì)胞綜合檢測(cè)方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 200810070940.2
• 申請(qǐng)日: 2008-04-18
• 公開（公告）號(hào): CN101560544A
• 公開（公告）日: 2009-10-21
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 趙宇;布蘭科·帕爾切克
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 麥克奧迪實(shí)業(yè)集團(tuán)有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/06
• 分類號(hào): C12Q1/06;C12Q1/68
• 代理公司: 廈門市新華專利商標(biāo)代理有限公司
• 代理人: 李 寧

1.一種細(xì)胞綜合檢測(cè)方法，其特征在于包括以下步驟：

第1步，對(duì)切片進(jìn)行染色處理，使細(xì)胞核染上較深的顏色，細(xì)胞 膜和細(xì)胞質(zhì)染上較淺的顏色，保證在捕捉到的圖像中，深色的細(xì)胞核 和淺色的細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞膜都能清解晰呈現(xiàn)；

染色處理步驟如下：

a.將制好的標(biāo)本片自然干燥；

b.將干燥的標(biāo)本片置入無水乙醇液內(nèi)固定30分鐘后，直接放入 B.S液中固定60分鐘，取出后用蒸餾水洗滌二次，再放入5mol/L的 鹽酸內(nèi)酸化60分鐘，酸化溫度在22℃～25℃，取出后用蒸餾水洗滌2 次；

c.將經(jīng)上述處理過的標(biāo)本片放入染色缸內(nèi)，加滿染色液染色67 分鐘，染色溫度在22℃～25℃，傾出染液，用蒸餾水沖洗5～6次；

d.用漂洗液洗滌三次，第一次1～2分鐘，第二次1～2分鐘，第 三次1～2分鐘，再用水洗滌2至3次；

e.進(jìn)入復(fù)染，放入95％乙醇液內(nèi)浸泡2～3分鐘；

f.在EA50染液中染胞漿5～8分鐘；

g.放入95％乙醇內(nèi)浸泡2～3分鐘；

h.在無水乙醇中浸泡兩次每次2～3分鐘；

i.將干燥的脫水片放入二甲苯原液缸內(nèi)透明30～60秒；

j.將透明過的標(biāo)本片用中性樹膠加蓋玻片封固；

其中，染色處理中使用的試劑包括B.S液、染色液、漂洗液、EA50 染液，其中：

每400毫升B.S液是由甲醇320.0毫升，甲醛60.0毫升，冰乙 酸20.0毫升配制而成；

每210毫升染色液包括：硫肼100.00毫克，叔丁醇液87.0毫升， 5mol/L鹽酸5.2毫升，1800毫克亞硫酸氫鈉，余量為蒸餾水；

每200毫升漂洗液包括：偏重亞硫酸鈉1.0克，5mol/L鹽酸2.0 毫升，蒸餾水198.0毫升；

每600毫升EA50染液包括：15毫升純凈水，亮綠0.3克，水溶 性曙紅Y2克，95％乙醇450毫升，純甲醇125毫升，冰醋酸10毫升， 磷鎢酸1克；

第2步，檢測(cè)細(xì)胞核以測(cè)定DNA含量，并且測(cè)量細(xì)胞的形態(tài)學(xué)參 數(shù)；

第3步，根據(jù)細(xì)胞的形態(tài)學(xué)特征參數(shù)、DNA含量及其它細(xì)胞核特 征參數(shù)給出檢測(cè)報(bào)告。

2.如權(quán)利要求1所述的一種細(xì)胞綜合檢測(cè)方法，其特征在于： 上述第2步中具體包括：

I.用自動(dòng)顯微鏡對(duì)切片進(jìn)行掃描，檢測(cè)細(xì)胞核并測(cè)量其DNA含 量，在掃描細(xì)胞核的過程中，系統(tǒng)在計(jì)算機(jī)中記錄下每個(gè)細(xì)胞的坐標(biāo) 位置；

II.測(cè)量細(xì)胞的形態(tài)學(xué)參數(shù)以進(jìn)行定量的形態(tài)學(xué)分析。

3.如權(quán)利要求2所述的一種細(xì)胞綜合檢測(cè)方法，其特征在于： 上述步驟I之后進(jìn)一步包括：

a.對(duì)于感興趣的細(xì)胞和DNA含量異常的細(xì)胞，檢測(cè)員再檢查掃描 過程中捕捉的細(xì)胞微環(huán)境圖像；

b.對(duì)于感興趣的細(xì)胞和DNA含量異常的細(xì)胞，系統(tǒng)自動(dòng)將該細(xì)胞 呈現(xiàn)在顯微鏡中心，或者檢測(cè)員手動(dòng)控制顯微鏡將該細(xì)胞呈現(xiàn)在顯微 鏡中，令全細(xì)胞圖像都被完整的捕捉到；

c.對(duì)于掃描過程中沒有被處理的細(xì)胞，檢測(cè)員控制計(jì)算機(jī)將該細(xì) 胞呈現(xiàn)在顯微鏡中心，并進(jìn)行細(xì)胞DNA含量和其它參數(shù)的測(cè)量；

d.檢測(cè)員在顯微鏡的圖像中選擇一個(gè)被掃描過的細(xì)胞，系統(tǒng)會(huì)自 動(dòng)在掃描得到的細(xì)胞列表中找到相應(yīng)的圖像及其DNA含量。

4.如權(quán)利要求1所述的一種細(xì)胞綜合檢測(cè)方法，其特征在于： 上述第2步中具體包括：

I.檢測(cè)員對(duì)細(xì)胞進(jìn)行形態(tài)學(xué)分析；

II.對(duì)于感興趣的細(xì)胞，檢測(cè)員控制計(jì)算機(jī)進(jìn)行細(xì)胞DNA含量和 其它參數(shù)的測(cè)量。

5.如權(quán)利要求1所述的一種細(xì)胞綜合檢測(cè)方法，其特征在于： 上述染色處理中所用試劑的配制方法如下：

B.S液的配制：甲醇320.0毫升，甲醛60.0毫升，冰乙酸20.0 毫升，混合均勻；

染色液的配制：精確稱取硫肼100.00毫克，加入蒸餾水100.0 毫升加熱煮沸8～12分鐘后冷卻至45～55℃，加入叔丁醇液87.0毫 升，混勻后再加入5mol/L鹽酸5.2毫升，加入1800毫克亞硫酸氫鈉， 混合，加蒸餾水至210毫升后置磁力加熱攪拌器上避光攪拌60～70 分鐘，攪拌環(huán)境溫度在33℃～38℃，過濾后在25℃調(diào)PH至1.3～1.5；

漂洗液的配制：稱取偏重亞硫酸鈉1.0克，加入5mol/L鹽酸2.0 毫升，加蒸餾水至200.0毫升，混合均勻；

EA50染液的配制：a.用吸管吸取10毫升純凈水置于一只干凈標(biāo) 本管中，用記號(hào)筆標(biāo)記伊紅，吸取5毫升純凈水置于另一只干凈標(biāo)本 管中，用記號(hào)筆標(biāo)記亮綠；b.稱取亮綠0.3克倒入標(biāo)記亮綠的標(biāo)本管 中，蓋上蓋子，用手搖晃直到亮綠完全溶解；c.稱取水溶性曙紅Y?2 克倒入標(biāo)記伊紅的標(biāo)本管中，蓋上蓋子，用手搖晃直到伊紅完全溶解； d.量取95％乙醇450毫升倒入洗凈的染色缸中，再量取純甲醇125毫 升倒入缸中；e.將溶解完全的亮綠液倒入缸中，將溶解完全的伊紅液 倒入缸中，吸取冰醋酸10毫升加入缸中，稱取磷鎢酸1克加入缸中， 用攪棒攪動(dòng)至混合均勻。