[發明專利]人參皂甙Rg1對自身免疫性腦脊髓炎小鼠的干預作用

無效

• 申請號: 200810070693.6
• 申請日: 2008-03-03
• 公開（公告）號: CN101244280A
• 公開（公告）日: 2008-08-20
• 發明（設計）人: 吳志英;王檸
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬華山醫院;福建醫科大學附屬第一醫院
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00;G01N33/48;A61K31/704;A61P37/02;A61P25/00
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1、一種應用人參皂甙Rg1干預自身免疫性腦脊髓炎小鼠的制備方法的條件建立，其特征是：

1)MOG35-55免疫誘導C57B1/6小鼠，建立EAE模型；

2)應用人參皂甙Rg1對EAE模型小鼠進行干預；

3)對生理鹽水對照組和Rg1干預組小鼠進行臨床表型的觀察；

4)對生理鹽水對照組和Rg1干預組小鼠進行病理組織學分析。

2、本發明的人參皂甙Rg1干預EAE的制備方法：

1)材料：人工合成MOG35-55肽鏈片段，不完全弗氏佐劑CFA，熱滅活的結核分枝桿菌，百日咳毒素，人參皂甙Rg1單體，10-12周的C57B1/6小鼠；

2)步驟：

(1)乳化液的制備??按照每只老鼠100微升乳化劑配制，其中含有MOG35-55?300μg，MT?500μg；用1×PBS溶解適量的MOG?35-55，將其由Eppendorf管轉移到5毫升的注射器內，取體積的CFA轉移至另外一個5毫升的注射器，先由抗原端推向CFA端，進行乳化；

(2)小鼠麻醉??水合氯醛，3μl/g，小鼠腹腔注射；

(3)模型誘導??100μl/只乳化液，雙腋下皮下注射；PT?200ng/只，尾靜脈注射；

(4)Rg1干預組??誘導當日起，Rg1以10mg/Kg/日對EAE小鼠進行干預；

(5)生理鹽水對照組??誘導當日起，生理鹽水以與Rg1等體積的量，對EAE小鼠進行干預；

(6)EAE模型臨床表型的觀察：

????臨床分級????臨床表現????0????0.5????1.0????2.0????2.5????3.0????3.5????4.0????5.0????無癥狀????尾部部分無力????尾部癱瘓????共濟失調，后肢輕癱????單側后肢的癱瘓????雙后肢癱瘓????后肢癱瘓，伴有前肢無力????四肢癱瘓????死亡

(7)EAE發病高峰期，小鼠經水合氯醛麻醉后，取腦組織和頸膨大，腰膨大，4％的多聚甲醛固定，脫水，浸臘，固定，石蠟包埋，切片，HE染色。

3、根據權利要求2所述的制備方法，其特征是：所述的等體積的CFA是將IFA按照10μg/μl補充MT獲得CFA。

4、根據權利要求2所述的制備方法，其特征是：所述的乳化過程中是連接管置于冰上，反復抽推直至阻力明顯增大，取一滴乳化劑滴入水中，乳化劑呈現球形而不分散則說明乳化完全；出現平展擴散即為未乳化好，需要繼續抽推進一步乳化。