[發明專利]人參皂甙Rg1對自身免疫性腦脊髓炎小鼠的干預作用

無效

• 申請號: 200810070693.6
• 申請日: 2008-03-03
• 公開（公告）號: CN101244280A
• 公開（公告）日: 2008-08-20
• 發明（設計）人: 吳志英;王檸
• 申請（專利權）人: 復旦大學附屬華山醫院;福建醫科大學附屬第一醫院
• 主分類號: A61K49/00
• 分類號: A61K49/00;G01N33/48;A61K31/704;A61P37/02;A61P25/00
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技術領域

本發明涉及中藥單體干預疾病的領域，具體的說是應用人參皂甙Rg1對自身免疫性腦脊髓炎小鼠進行干預，探討人參皂甙Rg1對多發性硬化的神經免疫機制的干預作用。

背景技術

多發性硬化(Multiple?Sclerosis，MS)是最常見的神經免疫病之一，在溫帶發病率可高達3‰。年輕人易患病，發病年齡大約在28歲；具有遷延、復發并逐漸惡化的特點，50％患者在首次發病15年后需借助拐仗行走，致殘率高。因此，本病危害性極大。由于MS發病機制迄今不清，目前尚無有效的治療方法。

MS的治療主要包括急性發作期的對證治療和慢性遷延期的預防復發治療。目前臨床上應用于對證治療的藥物主要為免疫抑制劑，如激素、硫唑嘌呤、環磷酰胺和環孢素A等，副作用極大，可引起上消化道出血、無菌性骨壞死、誘發和加重感染、肝、腎功能損害、白細胞下降并影響生育等。而預防復發的藥物目前較公認的是β-干擾素(利比)，緩解復發率為60％左右，但長期療效及安全性評價有待進一步隨訪研究，且價格昂貴，國內絕大多數老百姓難以承受，因此該藥尚未在臨床上廣為應用。為尋找一種能夠從減少復發，減輕發作嚴重程度及延緩疾病惡化，并適合我國國情(價格適中)的治療藥物，研究人員已更多地將目光投向傳統中藥制劑以尋求新的治療手段。

我國傳統的中藥在治療免疫病中有其獨到的功效，如雷公藤自20世紀80年代以來，便廣泛地應用于多種免疫性疾病如類風濕性關節炎及某些腎臟系統免疫性疾病等。但因中藥方劑成份較復雜，導致作用機制難以明確、毒副作用難以控制、藥物劑量難以規范化，極大限制了其在臨床上的推廣應用。目前國內外已經分離出許多中藥單體，其中部分單體在調節免疫方面功效確切，如雷公藤甲素(Triptolide，Tri)、人參皂甙Rg1在免疫調節、抗炎反應等方面均有獨到的作用。人參皂甙Rg1作為人參中有效的活性成份已進行了較多的實驗研究。研究發現Rg1具有選擇性增強老年鼠的免疫功能，而對健康的青年鼠免疫功能影響不明顯，因此認為Rg1是一種免疫調節劑，而不是單純的免疫增強劑。目前進一步的研究提示人參皂甙Rg1可增強CD4+T細胞活性，抑制Th1特異性細胞因子并上調Th2特異性細胞因子，拮抗Th1細胞作用并促進Th2細胞增殖，從而糾正Th1/Th2細胞的失衡狀態。但應用Rg1干預MS的實驗研究及臨床應用研究目前國內外罕見報道。

發明內容

本發明的目的是基于已經分離出的人參皂甙Rg1中藥單體對免疫調節和抗炎作用等方面的作用基礎上提出一種應用人參皂甙Rg1干預自身免疫性腦脊髓炎小鼠的制備方法。

本發明解決其技術問題所采用的技術方案是：一種應用人參皂甙Rg1干預自身免疫性腦脊髓炎小鼠的制備方法的條件建立，其特征是：

1、MOG35-55免疫誘導C57B1/6小鼠，建立EAE模型。

2、應用人參皂甙Rg1對EAE模型小鼠進行干預。

3、對生理鹽水對照組和Rg1干預組小鼠進行臨床表型的觀察。

4、對生理鹽水對照組和Rg1干預組小鼠進行病理組織學分析。

本發明的人參皂甙Rg1干預EAE的制備方法：

1、材料：人工合成MOG35-55(序列為MEVGWYRSPFSRVVHLYRNGK)肽鏈片段(該片段是已知的)，不完全弗氏佐劑CFA，熱滅活的結核分枝桿菌(Mycobacterium?tuberculosis，MT)，百日咳毒素(pertussis?toxin，PT)，人參皂甙Rg1單體，10-12周的C57B1/6小鼠。

2、步驟：

(1)乳化液的制備??按照每只老鼠100微升乳化劑配制，其中含有MOG35-55?300μg，MT?500μg。用1×PBS溶解適量的MOG?35-55，將其由Eppendorf管轉移到5毫升的注射器內，取等體積的CFA(將IFA按照10μg/μl補充適量的MT獲得CFA)轉移至另外一個5毫升的注射器，注意排盡管內的空氣，通過細的連接管將兩管連接，先由抗原端推向CFA端，進行乳化，乳化過程中連接管置于冰上，反復抽推直至阻力明顯增大，取一滴乳化劑滴入水中，乳化劑呈現球形而不分散則說明乳化完全，如出現平展擴散即為未乳化好，需要繼續抽推進一步乳化。

(2)小鼠麻醉??水合氯醛，3μl/g，小鼠腹腔注射。

(3)模型誘導??100μl/只乳化液，雙腋下皮下注射；PT?200ng/只，尾靜脈注射。

(4)Rg1干預組??誘導當日起，Rg1以10mg/Kg/日對EAE小鼠進行干預