[發(fā)明專利]利用細胞自發(fā)熒光光譜測定細胞周期的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810070303.5
• 申請日: 2008-09-16
• 公開（公告）號: CN101363836A
• 公開（公告）日: 2009-02-11
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 林曉鋼;潘英俊;郭永彩;高潮
• 申請（專利權(quán)）人: 重慶大學(xué)
• 主分類號: G01N33/48
• 分類號: G01N33/48;G01N21/64;C12Q1/02
• 代理公司: 重慶博凱知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司
• 代理人: 張先蕓

1.利用細胞自發(fā)熒光光譜測定細胞周期的非診斷性方法，其特征在于，包括如下步 驟：

1)將某種細胞的單個細胞作為一個變化體系，用處于正常生長狀態(tài)下的細胞周期G1 期、S期、G2期和M期的單個細胞作為標準樣品；

2)利用熒光分光光度計或熒光光譜儀測出被測細胞標準樣品的最佳激發(fā)波長，以最 佳激發(fā)波長做激發(fā)光測量該波長到700nm間的熒光光譜；

3)利用熒光分光光度計或熒光光譜儀在最佳激發(fā)波長到700nm范圍內(nèi)，對與所述標 準樣品同種類的被測樣品進行掃描，對所得光譜曲線進行預(yù)處理后，將被測樣品光譜曲線 的吸收峰強度與所述標準樣品的細胞周期的熒光光譜模型的吸收峰強度對比，即可判斷出 被測細胞處于細胞周期的哪一階段；

對于在熒光光譜范圍內(nèi)只有一個熒光峰的情況，則直接利用該熒光峰強度與細胞周期 的關(guān)系建立模型通過熒光峰強度對細胞周期進行判別；對于在熒光光譜范圍內(nèi)有多個峰的 情況，則采用距離激發(fā)波長最近的熒光峰，再利用該關(guān)系對細胞周期進行判別。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述利用細胞自發(fā)熒光光譜測定細胞周期的非診斷性方法，其特 征在于，所述標準樣品的獲得，要保證細胞樣品處于自然生長狀態(tài)下，采用光學(xué)顯微鏡觀 察根據(jù)形態(tài)變化，獲取處于細胞周期不同時相的細胞，將其制成標準樣品。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述利用細胞自發(fā)熒光光譜測定細胞周期的非診斷性方法，其特 征在于，所述最佳激發(fā)波長的測量方法是：首先用250nm為激發(fā)波長在250～700nm范圍對 被測細胞標準樣品進行掃描，得到該標準樣品細胞在250nm情況下的發(fā)射光譜過后，測量 250nm到發(fā)射光譜中的第一個熒光峰波長之間的激發(fā)光譜，找到激發(fā)光譜中熒光強度最強 的峰，這個峰所對應(yīng)的波長即為被測標準樣品細胞的最佳激發(fā)波長，最后以最佳激發(fā)波長 做激發(fā)光測量該波長到700nm間的熒光光譜，掃描間隔0.1nm。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述利用熒光光譜法測定細胞周期的非診斷性方法，其特征在于， 所述步驟2)中熒光光譜的測量是在生理溫度36.5±0.5℃下利用熒光分光光度計或熒光 光譜儀，進行標準樣品的熒光光譜測量，設(shè)定分光光度計的掃描范圍為最佳激發(fā)波長到 700nm，掃描步長0.1nm，掃描次數(shù)5次。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述利用熒光光譜法測定細胞周期的非診斷性方法，其特征在于， 所述預(yù)處理是將每一細胞周期的5組光譜數(shù)據(jù)取平均作為該樣品組細胞的標準光譜曲線， 將平均所得光譜曲線進行平滑濾波處理。