[發(fā)明專利]肺吸蟲病檢測試劑盒及其制備方法無效
| 申請?zhí)枺?/td> | 200810069585.7 | 申請日： | 2008-04-25 |
| 公開（公告）號： | CN101266253A | 公開（公告）日： | 2008-09-17 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 張錫林 | 申請（專利權(quán)）人： | 中國人民解放軍第三軍醫(yī)大學(xué) |
| 主分類號： | G01N33/68 | 分類號： | G01N33/68;G01N33/558;G01N33/532 |
| 代理公司： | 北京同恒源知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 | 代理人： | 趙榮之 |
| 地址： | 400038重*** | 國省代碼： | 重慶;85 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 肺吸蟲 檢測 試劑盒 及其 制備 方法 | ||
1、一種肺吸蟲病檢測試劑盒，包括檢測條、樣品稀釋液，其特征在于：檢測抗原為肺吸蟲ESP蛋白，其氨基酸序列如SEQ?ID?NO.2所示。
2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的肺吸蟲病檢測試劑盒，其特征在于：所述檢測抗原為膠體金標(biāo)記的肺吸蟲ESP蛋白。
3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的肺吸蟲病檢測試劑盒，其特征在于：所述檢測條由樣品墊(1)和吸收墊(5)順序貼附于帶背襯(6)的檢測層(2)上構(gòu)成；檢測層(2)上包被有抗人IgG抗體形成的檢測線(3)和抗肺吸蟲ESP蛋白的多克隆抗體形成的質(zhì)控線(4)。
4、根據(jù)權(quán)利要求2所述的肺吸蟲病檢測試劑盒，其特征在于：所述樣品稀釋液為濃度為0.01-0.05mol/L、pH值為7.0-7.2的磷酸鹽緩沖液即PBS緩沖液，內(nèi)含濃度為5-8μg/ml的膠體金標(biāo)記的肺吸蟲ESP蛋白、質(zhì)量百分濃度為1％的牛血清白蛋白即BSA。
5、根據(jù)權(quán)利要求3所述的肺吸蟲病檢測試劑盒，其特征在于：所述樣品稀釋液為濃度為0.01-0.05mol/L、pH值為7.0-7.2的PBS緩沖液，內(nèi)含濃度為5-8μg/ml的膠體金標(biāo)記的肺吸蟲ESP蛋白、質(zhì)量百分濃度為1％的BSA。
6、根據(jù)權(quán)利要求1、2、4、5之任一權(quán)利要求所述的肺吸蟲病檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒內(nèi)還有樣品稀釋孔。
7、根據(jù)權(quán)利要求3所述的肺吸蟲病檢測試劑盒，其特征在于：所述試劑盒內(nèi)還有樣品稀釋孔。
8、權(quán)利要求1所述的肺吸蟲病檢測試劑盒的制備方法，包括以下步驟：
a.肺吸蟲ESP蛋白的制備：肺吸蟲ESP蛋白的氨基酸序列如SEQ?ID?No.2所示，其編碼基因序列如SEQ?ID?No.1所示，根據(jù)氨基酸或核苷酸序列制備，即得肺吸蟲ESP蛋白；
b.抗肺吸蟲ESP蛋白的多克隆抗體的制備：用肺吸蟲ESP蛋白于哺乳動物的肌肉或皮下注射進(jìn)行多次免疫，收集被免疫動物的血液，分離血清，即得抗肺吸蟲ESP蛋白的多克隆抗體；
c.標(biāo)記的肺吸蟲ESP蛋白的制備：用標(biāo)記物對肺吸蟲ESP蛋白進(jìn)行標(biāo)記，即得標(biāo)記的肺吸蟲ESP蛋白；
d.檢測層的制備：將硝酸纖維素即NC膜置濃度為0.01-0.05mol/L、pH值為8.0-8.2、含有質(zhì)量百分濃度為1％的BSA、質(zhì)量百分濃度為1％的吐溫-20的PBS緩沖液中浸泡30分鐘，于溫度為37℃的條件下烘干；用抗體稀釋液即濃度為0.01mol/L、pH值為8.0-8.2、含有質(zhì)量百分濃度為1％的BSA的PBS緩沖液，對濃度為1mg/ml的抗人IgG抗體溶液、濃度為1mg/ml的抗肺吸蟲ESP蛋白的多克隆抗體溶液分別進(jìn)行1∶500-1∶1000稀釋；將稀釋后的抗人IgG抗體溶液、抗肺吸蟲ESP蛋白的多克隆抗體溶液，用點膜儀以每厘米2-3μl體積分別噴到NC膜上，形成檢測線和質(zhì)控線；包被有檢測線和質(zhì)控線的NC膜經(jīng)真空干燥后，用濃度為0.01mol/L、pH值為8.8-9.0、含有質(zhì)量百分濃度為1％的BSA的PBS緩沖液封閉2小時，再用濃度為0.01mol/L、pH值為8.8-9.0的PBS緩沖液洗滌，真空干燥，即得檢測層；
e.樣品墊的制備：將吸水濾紙置濃度為0.01mol/L、pH值為7.2的PBS緩沖液中浸泡30分鐘，于溫度為37℃條件下烘干，即得樣品墊；
f.吸收墊的制備：取吸水濾紙，即得吸收墊；
g.檢測條的制備：將樣品墊1和吸收墊5順序貼附于帶背襯6的檢測層2上，即得檢測條；
h.試劑盒的制備：將檢測條、樣品稀釋液、樣品稀釋孔裝盒，即得試劑盒；其中，樣品稀釋液為濃度為0.01-0.05mol/L、pH值為7.0-7.2、含有濃度為5-8μg/ml的標(biāo)記的肺吸蟲ESP蛋白、質(zhì)量百分濃度為1％的BSA的PBS緩沖液。
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