[發(fā)明專利]一種紅皮云杉體細(xì)胞胚誘導(dǎo)植株再生的方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810064037.5
• 申請日: 2008-02-27
• 公開（公告）號: CN101228848A
• 公開（公告）日: 2008-07-30
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李成浩;劉寶光;張含國;劉桂豐
• 申請（專利權(quán)）人: 東北林業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標(biāo)事務(wù)所
• 代理人: 金永煥

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及一種云杉體細(xì)胞胚誘導(dǎo)植株再生的方法。

背景技術(shù)

紅皮云杉(Picea?koraiensis?Nakai)又名紅皮臭，主要分布在中國的東北、朝鮮、和俄羅斯的遠(yuǎn)東地區(qū)，大量用于建筑業(yè)、裝潢業(yè)、造紙業(yè)，是我國東北地區(qū)的重要造林用材樹種之一。紅皮云杉分布區(qū)生態(tài)條件復(fù)雜，為種子園營建造成困難，營建和運營成本高；紅皮云杉的育種周期長達(dá)40年以上，繁殖率低，且由于生態(tài)環(huán)境破壞和長期過量采伐使其優(yōu)質(zhì)的種質(zhì)資源嚴(yán)重流失，近年來營建了一些種子園并選育出了一些15～20年即可成材的優(yōu)良無性系，但因受繁殖材料等因素限制在實際生產(chǎn)中還沒有得到大量應(yīng)用。目前紅皮云杉可以通過扦插進(jìn)行無性繁殖，但是，目前主要以3～6年生苗的插穗為材料生產(chǎn)扦插苗，培育周期長，另外，因為從每個幼樹可采集的插穗的數(shù)量有限，扦插繁殖的繁殖率也低。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是為了解決紅皮云杉常規(guī)育種周期長、繁殖率低的問題，而提供的一種紅皮云杉體細(xì)胞胚誘導(dǎo)植株再生的方法。

一種紅皮云杉體細(xì)胞胚誘導(dǎo)植株再生的方法按以下步驟實現(xiàn)：一、取經(jīng)過預(yù)處理的紅皮云杉合子胚接種于額外添加6-芐基氨基嘌呤、激動素、萘乙酸、谷氨酰胺、水解酪蛋白、蔗糖和膠立得的改良RJW培養(yǎng)基中，在溫度為21±1℃的環(huán)境中進(jìn)行暗培養(yǎng)至出現(xiàn)胚性愈傷組織；二、將胚性愈傷組織轉(zhuǎn)培養(yǎng)接種于額外添加脫落酸、谷氨酰胺、水解酪蛋白、蔗糖和膠立得的改良RJW培養(yǎng)基中，在溫度為21±1℃的環(huán)境中進(jìn)行暗培養(yǎng)至體細(xì)胞胚成熟，待體細(xì)胞胚子葉發(fā)育完全后，將培養(yǎng)瓶開蓋，在超凈工作臺內(nèi)選弱風(fēng)檔，用弱風(fēng)吹5～7天進(jìn)行干燥處理；三、干燥處理后的成熟體細(xì)胞胚轉(zhuǎn)接到額外添加激動素、萘乙酸、膠立得和蔗糖的改良RJW培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在溫度為24±1℃、光周期是明16h/暗8h的環(huán)境中培養(yǎng)至體細(xì)胞胚萌發(fā)；四、將萌發(fā)的體細(xì)胞胚轉(zhuǎn)接到額外添加活性炭的1/2改良RJW培養(yǎng)基中，在溫度為24±1℃、明16h暗8h交替的環(huán)境中培養(yǎng)至根和莖的形成，即得到紅皮云杉再生植株；步驟一改良RJW培養(yǎng)基中6-芐基氨基嘌呤的濃度為0.0～1.0mg/L、激動素的濃度為0.0～1.0mg/L、萘乙酸的濃度為0.0～5.0mg/L、谷氨酰胺的濃度為450mg/L、水解酪蛋白的濃度為750mg/L、蔗糖的濃度為20g/L、膠立得的濃度為2g/L；步驟二改良RJW培養(yǎng)基中脫落酸的濃度為0.0～9.5mg/L、谷氨酰胺的濃度為450mg/L、水解酪蛋白的濃度為500mg/L、蔗糖的濃度為60g/L、膠立得的濃度為2g/L；步驟三改良RJW培養(yǎng)基中激動素的濃度為0.02mg/L、萘乙酸的濃度為0.05mg/L、膠立得的濃度為2g/L、蔗糖的濃度為25g/L；步驟四1/2改良RJW培養(yǎng)基中活性炭的濃度為3g/L。

本發(fā)明一種紅皮云杉體細(xì)胞胚誘導(dǎo)植株再生的方法，以紅皮云杉未成熟種子為外植體誘導(dǎo)體細(xì)胞胚，獲得再生植株，使紅皮云杉的育種周期縮短了，且可利用的繁殖材料豐富，使繁殖率增大，比自然狀態(tài)下紅皮云杉的育種周期提高40倍以上，比扦插進(jìn)行無性繁殖的周期提高了3～6倍。本發(fā)明實現(xiàn)了紅皮云杉苗木的大規(guī)模、短周期、高繁殖率、低成本的工廠化生產(chǎn)，使一些優(yōu)質(zhì)的種質(zhì)資源得到快速而廣泛的應(yīng)用，使豐富的種質(zhì)資源得到保護(hù)，還可為該樹種的基因工程改良工作奠定基礎(chǔ)，從而培育出速生、豐產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)、抗逆的紅皮云杉新種質(zhì)，使該樹種的生態(tài)效益、經(jīng)濟(jì)效益和社會效益得到迅速、充分發(fā)揮。

具體實施方式