[發明專利]一種雞A－FABP抗血清制備及其在特異性鑒定中的應用方法

無效

• 申請號: 200810063846.4
• 申請日: 2008-01-11
• 公開（公告）號: CN101241129A
• 公開（公告）日: 2008-08-13
• 發明（設計）人: 李輝;石慧;王啟貴
• 申請（專利權）人: 東北農業大學
• 主分類號: G01N33/531
• 分類號: G01N33/531;G01N33/53
• 代理公司: 哈爾濱市哈科專利事務所有限責任公司
• 代理人: 劉婭

1、一種雞A-FABP抗血清制備方法，其特征是：

(1)根據雞A-FABP基因序列擴增其編碼區序列，并將該序列分別構建到原核表達質粒pGEX-4T-1和真核表達質粒pcDNA3中，得到雞A-FABP基因的原核表達質粒pGEX-4T-1/A-FABP和真核表達質粒pcDNA3/A-FABP；

(2)將原核表達質粒pGEX-4T-1/A-FABP轉入到大腸桿菌感受態細胞BL21DE中，利用IPTG誘導其表達雞A-FABP融合蛋白，融合蛋白經純化后免疫家兔制備抗血清。

2、根據權利要求1所述的制備方法得到的雞A-FABP抗血清在特異性鑒定中的應用方法，其特征是：

(1)將構建的真核表達質粒pcDNA3/A-FABP通過水動力轉染法注入小鼠體內，使該真核表達質粒在小鼠肝臟中表達，然后提取小鼠肝臟蛋白與上述制備的抗血清進行抗體特異性分析；

(2)分別取雞的心臟、肝臟、腹脂、肌肉、肌胃、脾、小腸、肺和腎9種組織，利用上述制備的抗血清進行抗體特異性分析。

3、根據權利要求2所述的一種雞A-FABP抗血清在特異性鑒定中的應用方法，其特征是：所述的水動力轉染法是通過小鼠尾靜脈快速注射真核表達質粒pcDNA3/A-FABP的方式實現的，即利用5mL醫用注射器向每只小鼠尾靜脈中注射體積為小鼠體重10％的重組質粒pcDNA3/A-FABP溶液，重組質粒pcDNA3/A-FABP為10ug，注射持續時間為5-8s。

4、根據權利要求2所述的一種雞A-FABP抗血清在特異性鑒定中的應用方法，其特征是：所述的抗體特異性分析方法是通過Western?blot方法實現的。

5、根據權利要求4所述的一種雞A-FABP抗血清在特異性鑒定中的應用方法，其特征是：所述的Western?blot方法為：提取雞的9種組織樣蛋白并定量，按每種組織100μg上樣，60V穩壓至蛋白跑過濃縮膠后，將電壓調至80V穩壓，電轉移的條件是200mA穩流40min。