[發明專利]從菊米中分離純化總黃酮的方法

無效

• 申請號: 200810063422.8
• 申請日: 2008-08-07
• 公開（公告）號: CN101332215A
• 公開（公告）日: 2008-12-31
• 發明（設計）人: 熊春華;姚彩萍;何崎;吳香梅
• 申請（專利權）人: 浙江工商大學
• 主分類號: A61K36/28
• 分類號: A61K36/28;A61K133/00
• 代理公司: 杭州中成專利事務所有限公司
• 代理人: 馮子玲

技術領域

本發明屬于天然產物分離純化領域，涉及天然產物中有效物質的分離純化工藝，具體為從菊米中分離純化總黃酮的方法。

背景技術

菊米是以野菊花的花蕾為原料，經殺青烘干制成的，黃酮類化合物是野菊花的主要有效成分之一(菊米初提物總黃酮含量可達13％)。目前對菊米的研究還停留在栽培技術以及藥理效用層面，對菊米中藥用成分的分離純化還未見報道。

目前，國內在天然產物總黃酮純化方面，多采用傳統的大孔吸附樹脂(AB-8，D101等)，傳統吸附樹脂由于在合成時僅采用疏水交聯劑，使得交聯劑單一而不能在增加吸附樹脂親水性的同時增加吸附樹脂的交聯度，從而使樹脂的孔結構均勻性差，對菊米中黃酮的吸附量和選擇性較差。傳統樹脂通過對提取液進行一次吸附脫附，完成總黃酮的純化。傳統大孔吸附樹脂對黃酮的吸附容量小(50mg/g-80mg/g)，解吸率低(70％-80％)，純化效果差(最終產品總黃酮含量40％左右)。

發明內容

本發明的目的在于針對從菊米中提取的總黃酮對吸附分離材料的基本要求，提供一種適用于總黃酮分離純化專用的大孔吸附樹脂及從菊米中分離純化總黃酮的方法。

本發明從高分子分子設計原理出發，采用高分子懸浮聚合工藝，通過加入一定的第三單體和具親水性能的第二交聯劑，達到改善樹脂孔結構均勻性、按照分離目標物菊米中黃酮的極性要求賦予樹脂適當極性內表面、同時提高樹脂對分離目標物的吸附容量和選擇性的目的。

本發明提供從菊米中分離純化總黃酮的方法，其特征在于：采用總黃酮分離純化專用大孔吸附樹脂動態吸附菊米中總黃酮，吸附飽和以后，采用動態解吸和蒸餾分離純化提純總黃酮；然后對一次純化后的樣品液采用同樣的方式進行二次純化；所述菊米提取液總黃酮濃度在3.0～4.0mg/ml范圍；所述動態吸附的條件是：選用專用大孔吸附樹脂，吸附柱內樹脂床的高度與直徑之比在5～13范圍，調節提取液pH為5.0～6.0，控制室溫≤35℃，控制菊米黃酮提取液流速為每小時1～2BV；所述動態解吸和蒸餾分離用70％乙醇進行脫附，將脫附液蒸餾，除去乙醇后獲總黃酮。

以上方案概述如下：

采用總黃酮分離純化專用大孔吸附樹脂，動態吸附從菊米中提取的總黃酮，吸附飽和以后，采用動態解吸并進行蒸餾分離提純；所述動態吸附的條件為：吸附柱內樹脂床的高度與直徑之比在5～13范圍，菊米粗提液總黃酮濃度在3.0～4.0mg/ml范圍，控制室溫條件≤35℃，控制流速為每小時1～2BV，通過70％乙醇進行脫附，將脫附液進行蒸餾，回收乙醇，從而分離純化總黃酮。采用菊米黃酮提取液流速為每小時1～2BV進行吸附操作，吸附分離純化總黃酮，當檢測流出液總黃酮濃度達到原液濃度時停止吸附，采用70％乙醇脫附并進行蒸餾分離回收。

本發明專用大孔吸附樹脂對菊米中總黃酮的高吸附容量和高選擇性，使其對菊米粗提液中的總黃酮進行高效吸附，通過對已吸附的樹脂進行乙醇脫附和蒸餾分離回收，從而達到提高菊米中總黃酮分離純化效果的目的。

本發明總黃酮分離純化專用大孔吸附樹脂合成反應的配方以重量計為：

St??????????????10-15份

DVB?????????????30～40份

2～4種功能單體??5～10份

偶氮引發劑??????0.5～2.0份

致孔劑??????????100～150份

分散劑??????????5～20份

蒸餾水??????????500～1000份

無機鹽??????????5-10份。

本發明的總黃酮純化專用的大孔吸附樹脂，是采用2～3種特殊功能單體和交聯劑在偶氮引發劑、致孔劑、分散劑、水和無機鹽存在條件下，采用懸浮聚合工藝進行高分子共聚合反應所合成；制備步驟如下：

1、按上述大孔吸附樹脂合成反應配方的重量份，準確稱取二乙烯基苯(DVB)；苯乙烯(St)；2～4功能單體；致孔劑以及偶氮引發劑等配制成油相，并攪拌0.5小時；

2、按上述配方的重量份將蒸餾水、分散劑及無機鹽配制成水相并升溫至60-65℃；

3、在攪拌下將預先配置好的油相緩慢加入盛有水相的反應器內；

4、調整反應器的攪拌速度，使油相分散成珠體后，將反應器的反應溫度升高到70-75℃，并保持該溫度到珠體定型；

5、將反應溫度升高到80-85℃，保溫5小時，85-90℃，保溫5小時；

6、將反應器溫度降至30-40℃，濾出珠體，水洗；