[發明專利]一種示蹤食品致病性細菌生長的檢測方法

無效

• 申請號: 200810063192.5
• 申請日: 2008-07-28
• 公開（公告）號: CN101339153A
• 公開（公告）日: 2009-01-07
• 發明（設計）人: 趙廣英;黃建鋒;鄧少平;田師一
• 申請（專利權）人: 浙江工商大學
• 主分類號: G01N27/27
• 分類號: G01N27/27;C12Q1/02
• 代理公司: 浙江杭州金通專利事務所有限公司
• 代理人: 徐關壽

技術領域

本發明涉及示蹤細菌生長狀況的快速檢測技術領域，特別是多頻大幅脈沖 智能化學分析系統在監測液體培養基中食源性致病菌生長情況的方法。

背景技術

近年來，食品致病性細菌引發的食物中毒等疾病受到社會高度關注。大腸 桿菌O157:H7(E.coli?O157:H7)、金黃色葡萄球菌(Staphylococcus?Aureus)、 鼠傷寒沙門氏菌(Salmonella?typhimurium)等被認為是幾種危害最大的食源性致 病菌，它們不但造成了巨大的經濟損失，也嚴重威脅到人類健康與安全。因此， 在食品生產、加工、儲藏和銷售等過程中，示蹤食品致病性細菌生長狀況及其 規律和有毒代謝產物產生規律的綜合信息，對指導食品的安全生產和衛生檢測 具有重要意義。

目前，所有示蹤食品致病性細菌生長狀況及其趨勢的檢測方法，包括傳統 的國標法和其他的快速檢測方法和新技術，都只能對菌體數量或對某一種成份 如ATP等含量的變化規律進行測定，不能反應菌體生長過程中對營養基質的消耗 狀況、代謝變化規律的綜合信息。因此，建立一種準確、靈敏、簡便且經濟的 示蹤食品致病性細菌生長代謝狀況綜合信息的快速檢測方法尤為重要。

菌種不同，自身所含酶系統不同，代謝方式和代謝途徑就不相同，對營養 物質的分解利用和產生的產物亦不相同。即使是同一種菌體，乃至同株甚至克 隆菌體的不同生長時期，在同一個限定的環境中，對基質的利用程度和代謝產 物也是不盡相同的，利用多頻大幅脈沖傳感系統可以分析和示蹤這些變化的綜 合信息，并具有不受樣品顏色、濁度的影響，樣品可以不經處理，檢測前后無 損耗，所用儀器設備相對簡單等優點。

目前，有用免疫傳感器、石英晶體壓電傳感器其他生物傳感器監測食品微 生物的研究報道，這些方法均存在一些關鍵技術問題沒有得到解決，從而限制 了其發展和應用。用高靈敏度的電子舌快速評價食品質量安全性是為國內外研 究的前沿，目前僅應用于檢測食品和農產品中重金屬污染、農藥殘留和產品真 偽辨識等領域。

智能化學分析系統(通常稱作電子舌)，通過傳感器陣列(相當于生物系統 中的舌頭)感受不同的化學物質，采集各種不同的信號信息輸入電腦。電腦代 替了生物系統中的大腦功能，通過軟件進行分析處理，區分辨識不同性質物質 的整體特征。

專利申請號為200710068869.X的專利申請公開了一種用于液體樣品的智能 化學分析系統，包括傳感器陣列、信號激勵采集裝置和智能分析單元，信號激 勵采集裝置將預定的激發脈沖序列加到輔助電極，同時采集工作電極產生的響 應信號；智能分析單元包括信號激勵采集裝置上位機和數據智能分析軟件，用 于對響應信號進行處理和分析；該智能化學分析系統的信號激勵采集裝置為多 頻脈沖信號激勵采集裝置，能產生多頻率段的大幅脈沖電勢；它的動作步驟如 下：1.通過單片機控制DAC數/模轉換模塊，激勵信號輸入恒電位儀后加至輔助 電極；2.工作電極產生的電流由程控電流跟隨器轉換為電壓信號，進入反相放大 器；3.由低通濾波去除信號中的噪聲，輸入ADC模/數轉換模塊轉換成數字量反 饋給單片機。

由于該智能化學分析系統采用多頻脈沖伏安法為信號激發采集模式，相比 現有技術響應信號強，信噪音比高，信息量更豐富；同時采用了適合其自身數 據結構特點使用的，方便、智能化的智能分析軟件，具有響應信號強、信號穩 定，信噪音比高，信息量豐富、分辨率高、易于操作等特點。

利用該智能化學分析系統具有非專一性、弱選擇性、對溶液中不同組分(有 機和無機，離子和非離子)具有高度交叉敏感的特性，對不同生長時期的菌群培 養液進行檢測，結合適當的模式識別算法和多變量分析方法對陣列數據進行處 理，獲得培養液樣本定性定量信息，從而可以監測菌群的生長情況。

發明內容

本發明的目的在于提供一種準確、靈敏、簡便、高效、經濟的示蹤食品致 病性細菌生長和代謝綜合信息的檢測方法，即一種用多頻大幅脈沖智能化學分 析系統監測菌群生長的方法。

本發明的上述目的通過以下技術方案實現的：

一種示蹤食品致病性細菌生長的檢測方法，其特征在于包括以下步驟：

a.將待測菌種接種于1％葡萄糖肉湯培養基中，靜止培養18小時，制備種子 液；