[發明專利]L-氨基酸衍生物的生物催化制備方法

無效

• 申請號: 200810062997.8
• 申請日: 2008-07-11
• 公開（公告）號: CN101423861A
• 公開（公告）日: 2009-05-06
• 發明（設計）人: 張子張;郭紅纓
• 申請（專利權）人: 浙江大學;杭州慧根藥業有限公司
• 主分類號: C12P41/00
• 分類號: C12P41/00;C12P13/04;C12P13/22;C12R1/01
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司
• 代理人: 張法高;趙杭麗

技術領域

本發明屬于化合物的制備方法，一種通過生物催化清除消旋體中D-型異構體制備高對映體純的L-氨基酸的方法，主要涉及L-苯丙氨酸的衍生物的生物催化制備方法。?

背景技術

非蛋白氨基酸，如高純度含不同取代基的L-氨基酸衍生物，是現代新藥研發的重要工具和基礎原料。結構多樣的非蛋白氨基酸在世界市場上一直價格昂貴，供不應求。非蛋白氨基酸等的制備能力也是一個國家新藥研發能力的象征性指標，與發達國家相比，我國在該領域落后的差距較大。由于產品附加值高，進入市場容易，非蛋白氨基酸制造技術的發展競爭激烈。現行方法有化學合成法和生物轉化法。前者用不對稱催化劑，價格昂貴且回收難，過程中尚有保護去保護等步驟；后者有海因法，水解酶拆分法等，但每種方法都需要多步反應，工藝復雜，路線長，排放物種類多等弊端。?

發明內容

本發明的目的是提供一種簡單的高純度L-氨基酸的生物催化制備方法，通過以下技術方案實現：用細菌活細胞做催化劑。?

在500ml搖瓶中，放置100ml培養基(營養肉汁瓊脂：蛋白胨10克，牛肉提取物3克，瓊脂15克，NaCl?5克，蒸餾水1000毫升)，接種細菌Aeromonas?sp.(氣單胞菌)，生長24小時后，離心，傾出清液，置回搖瓶中，每瓶中加入相同量消旋體D，L-氨基酸50mg；調pH7.3，通空氣，透氣封口，放回在控溫搖床中，圓周式搖動，生物轉化反應時間4-40小時，期間通過不定期采樣，超濾、稀釋，注入HPLC進行分析追蹤轉化進程，用大賽路冠醚手性色譜柱分析，分析時間控制在到120分鐘，找到消旋體底物的兩個等比信號峰(分布在15-60分鐘，見實例色譜圖)。實施中，通過HPLC上消旋體底物的兩個峰中D型峰的消耗跟蹤反應進程，當D的信號超出檢測靈敏限度后，停止生物轉化反應。反應混合物經離心收取清液，通過離子交換樹脂柱分離，得到L型氨基酸衍生物。本發明所用的微生物菌株為氣單胞菌，送交中國微?生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，保藏編號為CGMCC?No.2226。?

本發明的有益之處是：(1)含多種酶的細菌Aeromonas?sp.(氣單胞菌)(CGMCC?2226)活細胞，在通空氣的條件下，能夠選擇性地氧化消旋體氨基酸中D-型異構體，留下未反應的L-型。這一方法可用于高純度L-型氨基酸的制備，也可以用于L-氨基酸中D-摻雜物的清除。(2)本發明方法無需傳統方法中常用的先保護、再去保護的衍生步驟，可直接將消旋體中D-型氨基酸選擇性地轉化，留下未反應的高純度的L-氨基酸。(3)本發明方法，路線簡短，效率高，可控制產物的對映體純度。(4)本發明方法也可用于其他類L型非蛋白氨基酸衍生物的制備。(5)本發明方法，制備過程不用金屬催化劑、有機溶劑及助劑，反應在中性條件進行，除可再生的生物質外，無化學排放，屬綠色環保生產過程。(6)本發明方法設計合理，資源節省，步驟簡單。?

附圖說明

圖1(A，B，C)苯丙氨酸生物轉化不同時間下反應混合物的色譜圖。?

圖2(A，B，C)4-氟苯丙氨酸生物轉化不同時間下反應混合物的色譜圖。?

圖3(A，B，C)2-氯苯丙氨酸生物轉化不同時間下反應混合物的色譜圖。?

圖4(A，B，C)4-氯苯丙氨酸混合物轉化不同時間下反應混合物的色譜圖。?

圖5(A，B，C)2，4-二氯苯丙氨酸生物轉化不同時間下反應混合物的色譜圖。?

圖6(A，B，C)3，4-二氯苯丙氨酸生物轉化不同時間下反應混合物的色譜圖。?

圖7(A，B，C)2-溴苯丙氨酸生物轉化不同時間下反應混合物的色譜圖。?

圖8(A，B，C)4-溴苯丙氨酸混合物轉化不同時間下反應混合物的色譜圖。?

圖9(A，B，C)4-甲基苯丙氨酸混合物生物轉化不同時間下反應混合物的色譜圖。?

圖10(A，B，C)4-硝基苯丙氨酸生物轉化不同時間下反應混合物的色譜圖。?

圖11(A，B，C)酪氨酸生物轉化不同時間下反應混合物的色譜圖。?

具體實施方式

本發明結合附圖和實施例作進一步的說明。?

實施例1??高純度L-苯丙氨酸衍生物的制備(以苯丙氨酸為例)?