[發明專利]線性聚N－異丙基丙烯酰胺協助溶菌酶體外復性的方法

無效

• 申請號: 200810062428.3
• 申請日: 2008-06-06
• 公開（公告）號: CN101298610A
• 公開（公告）日: 2008-11-05
• 發明（設計）人: 關怡新;陳瑩瑩;葛翔;姚善涇
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N9/36
• 分類號: C12N9/36
• 代理公司: 杭州求是專利事務所有限公司
• 代理人: 張法高

1.一種線性聚N-異丙基丙烯酰胺協助溶菌酶體外復性的方法，其特征在于方法的步驟如下：

1)將摩爾濃度比為10∶1～20∶1的N-異丙基丙烯酰胺和偶氮二異丁腈溶于無水乙醇中，N-異丙基丙烯酰胺的濃度為1mol/L，在50～70℃和氮氣保護下反應12～24h，減壓蒸發除去大部分乙醇，所得反應產物用丙酮溶解，溶解后的溶液緩慢滴入不斷攪拌的正己烷中，得白色沉淀，反應產物溶解和沉淀步驟重復2～3次，得到線性聚N-異丙基丙烯酰胺，置于真空干燥器中干燥至恒重；

2)將溶菌酶溶于變性緩沖液中，配制成濃度為10mg/mL的溶液，將溶液置于37℃、100rpm搖床中處理60～90min，得到無活性的去折疊態溶菌酶溶液，取0.02～0.1mL無活性的去折疊態溶菌酶溶液，緩慢加入到復性緩沖液中，混勻，復性體系的終體積為1mL，其中，線性聚N-異丙基丙烯酰胺的質量濃度為變性溶菌酶濃度的0.1～10倍，溶液于20～40℃、100～180rpm搖床中復性12～24h。

2.根據權利要求1所述的一種線性聚N-異丙基丙烯酰胺協助溶菌酶體外復性的方法，其特征在于所述的N-異丙基丙烯酰胺采用正己烷重結晶。

3.根據權利要求1所述的一種線性聚N-異丙基丙烯酰胺協助溶菌酶體外復性的方法，其特征在于所述的偶氮二異丁腈采用無水乙醇重結晶。

4.根據權利要求1所述的一種線性聚N-異丙基丙烯酰胺協助溶菌酶體外復性的方法，其特征在于所述的變性緩沖液為含有8mol/L尿素、1mmol/L乙二胺四乙酸鈉和30mmol/L二硫蘇糖醇的50mmol/L三(羥甲基)氨基甲烷-鹽酸溶液，pH?8.5。

5.根據權利要求1所述的一種線性聚N-異丙基丙烯酰胺協助溶菌酶體外復性的方法，其特征在于所述的復性緩沖液為含有1mmol/L乙二胺四乙酸鈉、1.8mol/L尿素、10mmol/L還原型谷胱甘肽和1mmol/L氧化型谷胱甘肽的50mmol/L三(羥甲基)氨基甲烷-鹽酸溶液，pH8.5。