[發(fā)明專利]胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞分離和體外擴(kuò)增培養(yǎng)方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810061267.6
• 申請日: 2008-03-20
• 公開（公告）號: CN101270349A
• 公開（公告）日: 2008-09-24
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王金福;袁文佶;石東燕
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江大學(xué)
• 主分類號: C12N5/08
• 分類號: C12N5/08;G01N33/53
• 代理公司: 杭州求是專利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 張法高;趙杭麗

1.一種胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞分離和體外擴(kuò)增培養(yǎng)方法，通過以下方案實(shí)現(xiàn)：

取胎盤母體側(cè)蛻膜，剪碎后用0.1％IV型膠原酶消化并收集細(xì)胞，以含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基和2mML-谷氨酰胺進(jìn)行貼壁培養(yǎng)，再行負(fù)、正向免疫分選結(jié)合的方法純化胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞，獲得CD34^-CD105⁺細(xì)胞，再在體外無血清培養(yǎng)體系中繼代擴(kuò)增培養(yǎng)，其中所述負(fù)向純化是行陰性免疫篩選，所述正向純化是行陽性免疫篩選，所述無血清體外培養(yǎng)體系含有無血清培養(yǎng)基和成纖維細(xì)胞生長因子-2。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞分離和體外擴(kuò)增培養(yǎng)方法，其特征是：所述無血清培養(yǎng)基含有DMEM/F12培養(yǎng)液、L-谷氨酰胺、β-巰基乙醇和非必需氨基酸，其組成比例為DMEM/F12培養(yǎng)液∶1mM?L-谷氨酰胺∶0.1mM?β-巰基乙醇∶1％非必需氨基酸，無血清培養(yǎng)基與成纖維細(xì)胞生長因子-2的比例為1∶5ng/ml。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞分離和體外擴(kuò)增培養(yǎng)方法，其特征是：所述的陰性免疫篩選是采用CD34標(biāo)記磁珠分選，獲得CD34^-細(xì)胞。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞分離和體外擴(kuò)增培養(yǎng)方法，其特征是：所用的陽性免疫篩選是采用CD105標(biāo)記磁珠分選，獲得CD34^-CD105⁺細(xì)胞。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞分離和體外擴(kuò)增培養(yǎng)方法在純化胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞中應(yīng)用。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞分離和體外擴(kuò)增培養(yǎng)方法在胎盤間充質(zhì)干細(xì)胞體外擴(kuò)增培養(yǎng)中應(yīng)用。