[發明專利]重組耐高溫超氧化物岐化酶的高密度發酵與純化工藝

有效

• 申請號: 200810061168.8
• 申請日: 2008-03-13
• 公開（公告）號: CN101275144A
• 公開（公告）日: 2008-10-01
• 發明（設計）人: 孟凡國;夏勇;王天文;胡衛江;周海夢
• 申請（專利權）人: 浙江清華長三角研究院;嘉興博泰生物科技發展有限公司
• 主分類號: C12N15/53
• 分類號: C12N15/53;C12N15/70;C12N9/08;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 杭州九洲專利事務所有限公司
• 代理人: 翁霽明

1.?一種重組耐高溫超氧化物岐化酶的高密度發酵與純化工藝，它包括：以嗜熱菌中編碼SOD的基因為模板，設計帶有限制性酶切位點的特異引物擴增目的基因，經雙酶切后連接于經相同酶切處理后的質粒載體pET28a中，構建重組質粒，命名為pSOD，然后經化學轉化法將質粒pSOD轉化至感受態大腸桿菌BL21(DE3)，經篩選，獲得高產SOD的菌株，完成SOD工程菌的構建。

2.?根據權利要求1所述的重組耐高溫超氧化物岐化酶的高密度發酵與純化工藝，其特征在于所述的雙酶切位點是EcoR?I和Sal?I。

3.?根據權利要求1所述的重組耐高溫超氧化物岐化酶的高密度發酵與純化工藝，其特征在于所述的克隆載體和表達載體用的是同一種質粒-pET28a；用BL21(DE3)作為表達菌株。

4.?一種重組耐高溫超氧化物岐化酶的高密度發酵與純化工藝，該發酵工藝至少包括：經過一級種子培養、二級種子培養、上罐發酵、誘導表達四個步驟，最終獲得發酵產物-SOD，且該發酵工藝可以實現SOD的高效表達，使目的蛋白的表達量占菌體蛋白總量的60％以上。

5.?根據權利要求4所述的重組耐高溫超氧化物岐化酶的高密度發酵與純化工藝，其特征在于發酵基本培養基按照如下表5進行配制；發酵用補料培養基按照如下表6進行配制，補料間隔為4-5h。

表5高密度發酵基本培養基

??營養??終濃度??胰蛋白胨??10g/L??酵母提取物??10g/L??NaCl??10g/L??葡萄糖??20g/L??K₂HPO₄??2g/L??MgSO4·7H2O??0.25g/L??(NH4)₂SO4??5g/L??Kana??50mg/L

表6高密度發酵補料培養基

?成份??補料量??補料頻率?葡萄糖??80g??5h?(NH4)₂SO4??20g??5h?K₂HPO₄??8g??5h

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