[發明專利]一種人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法

無效

• 申請號: 200810060543.7
• 申請日: 2008-03-27
• 公開（公告）號: CN101248761A
• 公開（公告）日: 2008-08-27
• 發明（設計）人: 陳劍平;徐剛;汪一婷;呂永平;牟豪杰
• 申請（專利權）人: 浙江省農業科學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G1/00;A01G1/06;A01G31/00;C12N5/04
• 代理公司: 杭州九洲專利事務所有限公司
• 代理人: 陳繼亮

技術領域

本發明涉及植物脫毒組培快繁技術領域，尤其涉及一種人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法。

背景技術

人參果(Solamun?muricatum?Ait)又名香艷果，為茄科直立多年生草本或亞灌木，原產南美洲的秘魯、厄瓜多爾地區。其性喜溫暖、涼爽、干燥氣候，生長適溫18～20℃。人參果以漿果供食，低糖、低脂，可炒、燒、炸、做湯、鮮食等。據分析，其果實富含人體所需的維生素及各種微量元素：銅、鉀、鎂、硒等。食用人參果，對各種癌癥、高血壓、糖尿病、冠心病等有較好的防治效果，被譽為抗癌之王、綠色保健珍品。近年來國內引進推廣種植，且適應性廣、抗逆性強，生產效益高，市場前景好。人參果常規栽培以莖段扦插繁殖為主，但幼苗和成株極易感染煙草花葉病毒、黃瓜花葉病毒和馬鈴薯M病毒等多種病毒，體內病毒感染嚴重，并逐代積累，嚴重影響其生長發育，表現為葉片皺縮、變小，死亡率較高，坐果率低，產量大幅度下降。通過植物莖尖脫毒培養進行種苗脫毒和快速繁殖是生產無病毒種苗的有效途徑。

無毒苗生產需要快速、靈敏、特異的檢測方法。指示植物檢測是一種準確、可靠的檢測方法，至今人參果病毒病的檢測仍主要依靠于指示植物檢測，按照常規做法，首先必須將試管苗進行生根培養，移栽成活后才能用指示植物進行檢測，并以指示植物檢測的結果作為判斷待檢植物是否帶毒的最終依據。但這種方法費時較長，需要1年的時間才能完成，并且病毒病的癥狀表現易受環境因素的影響。因此需要尋找更好的人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法。

發明內容

本發明要解決上述現有技術的缺陷，提供一種人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法。

本發明目的通過以下技術方案來實現：這種人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法，按如下步驟進行：

1)、培養基的配制，包括基本培養基和組培各階段培養基的各組分與每升所含重量為：

(1)基本培養基：選用MS培養基或1/2MS培養基，蔗糖或白糖20～30g/L，瓊脂7～9g/L，pH5.6～5.8；

(2)誘導培養基：MS+BA?0.5～2.0mg/L+IAA?0.05～0.5mg/L；

(3)微扦插培養基：MS+BA0.1～1.0mg/L+NAA0.05～0.5mg/L；

(4)壯苗培養基：MS+BA?0.05～0.5mg/L+NAA?0.01～0.1mg/L+PP₃₃₃?0.1～0.5mg/L；

(5)微嫁接培養基：MS+BA?0.05～0.5mg/L+IBA?0.05～0.5mg/L；

(6)生根培養基：1/2MS+NAA?0.05～0.5mg/L；

(7)無菌播種培養基：1/2MS。

2)、人參果莖尖脫毒培養：

(1)外植體的選取與滅菌：從盆栽植株或大田植株上剪取頂芽或帶腋芽莖段為外植體，經滅菌處理，作為脫毒組培用的外植體；

(2)莖尖培養：將滅菌處理后的頂芽或帶腋芽莖段在無菌條件下，在40倍的雙筒解剖鏡下，摘出0.2～0.3mm大小的帶1～2個葉原基的莖尖，接種在誘導培養基上，在培養條件下培養20～30天后，從莖尖誘導形成幼芽，再培養20～30天，莖不斷抽長，培養成約3～5節、高5～7cm的幼苗；

(3)微扦插培養：將誘導形成的幼苗切成一節一芽、約3～5節轉接到微扦插培養基上，在培養條件下培養30～45天每節又培養成約3～5節、高5～7cm的幼苗；根據對幼苗數量的需求，每隔30～45天按同樣方法進行幼苗再微扦插培養；

(4)壯苗培養：將微扦插培養成約3～5節、高5～7cm的幼苗切成一節一芽、約3～5節接種到壯苗培養基上，在培養條件下培養30～45天，幼苗約2～3節、高3～5cm、莖變粗；

3)、指示植物番茄的無菌苗培養：

(1)外植體的選取與滅菌：取番茄的種子，經滅菌處理，作為無菌播種的外植體；

(2)無菌播種培養：將滅菌處理后的種子接種在無菌播種培養基上，在培養條件下培養20～30天后，從種子培育成高約5～7cm的幼苗；

(3)微扦插培養：將誘導形成的幼苗切成一節一芽、約3～5節轉接到微扦插培養基上，在培養條件下培養30～45天每節又培養成約3～5節、高5～7cm的幼苗；根據對幼苗數量的需求，每隔30～45天按同樣方法進行幼苗再微扦插培養。

4)、微嫁接培養：

(1)微嫁接砧木準備：將步驟2)人參果莖尖脫毒培養的幼苗在無菌操作條件下切成一個個帶腋芽的莖段，用解剖刀將腋芽小心的去掉，并在莖段的上部縱切一個長約0.5cm的切口，作為微嫁接砧木；