[發(fā)明專利]一種人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法

無效

• 申請?zhí)枺?/td>: 200810060543.7
• 申請日: 2008-03-27
• 公開（公告）號: CN101248761A
• 公開（公告）日: 2008-08-27
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 陳劍平;徐剛;汪一婷;呂永平;牟豪杰
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江省農(nóng)業(yè)科學(xué)院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01G1/00;A01G1/06;A01G31/00;C12N5/04
• 代理公司: 杭州九洲專利事務(wù)所有限公司
• 代理人: 陳繼亮

1、一種人參果脫毒組培苗的病毒快速檢測方法，其特征在于：該方法按以下步驟進行：

1)、培養(yǎng)基的配制，包括基本培養(yǎng)基和組培各階段培養(yǎng)基的各組分與每升所含重量為：

(1)基本培養(yǎng)基：選用MS培養(yǎng)基或1/2MS培養(yǎng)基，蔗糖或白糖20～40g/L，瓊脂7～9g/L，pH5.6～5.8；

(2)誘導(dǎo)培養(yǎng)基：MS+BA?0.5～2.0mg/L+IAA?0.05～0.5mg/L；

(3)微扦插培養(yǎng)基：MS+BA?0.1～1.0mg/L+NAA?0.05～0.5mg/L；

(4)壯苗培養(yǎng)基：MS+BA0.05～0.5mg/L+NAA0.01～0.1mg/L+PP₃₃₃0.1～0.5mg/L；

(5)微嫁接培養(yǎng)基：MS+BA?0.05～0.5mg/L+IBA?0.05～0.5mg/L；

(6)生根培養(yǎng)基：1/2MS+NAA?0.05～0.5mg/L；

(7)無菌播種培養(yǎng)基：1/2MS；

2)、人參果莖尖脫毒培養(yǎng)：

(1)外植體的選取與滅菌：剪取頂芽或帶腋芽莖段為外植體，經(jīng)滅菌處理，作為脫毒組培用的外植體；

(2)莖尖培養(yǎng)：將滅菌處理后的頂芽或帶腋芽莖段在無菌條件下，在雙筒解剖鏡下，摘出0.2～0.3mm大小的帶1～2個葉原基的莖尖，接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)條件下培養(yǎng)20～30天后，從莖尖誘導(dǎo)形成幼芽，再培養(yǎng)20～30天，培養(yǎng)成3～5節(jié)、高5～7cm的幼苗；

(3)微扦插培養(yǎng)：將誘導(dǎo)形成的幼苗切成一節(jié)一芽、3～5節(jié)轉(zhuǎn)接到微扦插培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)條件下培養(yǎng)30～45天每節(jié)又培養(yǎng)成3～5節(jié)、高5～7cm的幼苗；根據(jù)對幼苗數(shù)量的需求，每隔30～45天按同樣方法進行幼苗再微扦插培養(yǎng)；

(4)壯苗培養(yǎng)：將微扦插培養(yǎng)成3～5節(jié)、高5～7cm的幼苗切成一節(jié)一芽、3～5節(jié)接種到壯苗培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)條件下培養(yǎng)30～45天，幼苗2～3節(jié)、高3～5cm、莖變粗；

3)、指示植物番茄的無菌苗培養(yǎng)：

(1)外植體的選取與滅菌：取番茄的種子，經(jīng)滅菌處理，作為無菌播種的外植體；

(2)無菌播種培養(yǎng)：將滅菌處理后的種子接種在無菌播種培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)條件下培養(yǎng)20～30天后，從種子培育成高5～7cm的幼苗；

(3)微扦插培養(yǎng)：將誘導(dǎo)形成的幼苗切成一節(jié)一芽、3～5節(jié)轉(zhuǎn)接到微扦插培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)條件下培養(yǎng)30～45天每節(jié)又培養(yǎng)成3～5節(jié)、高5～7cm的幼苗；根據(jù)對幼苗數(shù)量的需求，每隔30～45天按同樣方法進行幼苗再微扦插培養(yǎng)；

4)、微嫁接培養(yǎng)：

(1)微嫁接砧木準備：將步驟2)人參果莖尖脫毒培養(yǎng)的幼苗在無菌操作條件下切成一個個帶腋芽的莖段，將腋芽去掉并在莖段的上部縱切一個長0.5cm的切口，作為微嫁接砧木；

(2)微嫁接接穗準備：將步驟3)無菌苗培養(yǎng)的指示植物番茄的幼苗切成帶單芽的莖段，芽上面的部分留0.3～0.5cm，芽下面的部分留0.5～1.0cm，并將其下部削成楔形，削面長0.3cm，作為微嫁接接穗；

(3)微嫁接器準備：將步驟2)人參果莖尖脫毒培養(yǎng)的幼苗在無菌操作條件下切成一個個長1.5cm的不帶腋芽的莖段，用解剖刀在莖段中間縱切一個長0.5cm的開口；

(4)微嫁接：將微嫁接器套入微嫁接砧木的切口下方，然后將微嫁接接穗插入微嫁接砧木上端的縱切口中，最后將微嫁接砧木的切口下方的微嫁接器往上移至微嫁接砧木的切口處，將微嫁接砧木的切口和微嫁接接穗固定牢；

(5)微嫁接苗培養(yǎng)：將嫁接苗接種到微嫁接培養(yǎng)基中進行培養(yǎng)，在培養(yǎng)條件下經(jīng)45～60天的培養(yǎng)，指示植物苗生長正常、無病毒病的癥狀的為脫病毒苗；指示植物表現(xiàn)出病毒病的癥狀的為未脫除病毒苗；

5)、脫病毒組培苗的增殖培養(yǎng)：

(1)微扦插培養(yǎng)：將步驟4)檢測出脫病毒的同一編號的組培苗切成一節(jié)一芽、3～5節(jié)轉(zhuǎn)接到微扦插培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)條件下培養(yǎng)30～45天每節(jié)又培養(yǎng)成3～5節(jié)、高5～7cm的幼苗；根據(jù)對幼苗數(shù)量的需求，每隔30～45天按同樣方法進行幼苗再微扦插培養(yǎng)；

(2)壯苗培養(yǎng)：將微扦插培養(yǎng)成約3～5節(jié)、高5～7cm的幼苗切成一節(jié)一芽、約3～5節(jié)接種到壯苗培養(yǎng)基上，在培養(yǎng)條件下培養(yǎng)30～45天，幼苗約2～3節(jié)、高3～5cm、莖變粗；

(3)生根培養(yǎng)：將培養(yǎng)的壯苗接種在生根培養(yǎng)基中進行生根培養(yǎng)，在培養(yǎng)條件下培養(yǎng)20～30天后，幼苗長高成5～7cm、苗基部長出5～10根細根；

(4)移栽：將生根組培苗移栽于基質(zhì)中，培育1～2個月至成苗；

(5)定植：將移栽苗定植在大田中，培育6～10個月至植株。